詳細介紹
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調控;
⑤細胞分化及其調控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產品屬性:
英文名稱:CA-074
產品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
CA-074是組織蛋白酶B(cathepsin B)的有效抑制劑,Ki值為2to5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:134448-10-5 純度:98.92% 分子量:383.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
干酪菌Saccharomyces cerevisiae
德氏乳桿菌保加亞亞種Saccharomyces cerevisiae
費希爾曲霉Saccharomyces cerevisiae
孟氏假單胞菌Saccharomyces cerevisiae
棒曲霉Saccharomyces cerevisiae
Bacillus atrophaeusSaccharomyces cerevisiae
磚紅鐮孢Saccharomyces cerevisiae
少根根霉Candida sp.
土脂環(huán)芽胞桿菌(土脂環(huán)桿菌)Saccharomyces cerevisiae
黎巴嫩珊瑚狀放線菌Candida sp.
馬闊里類芽孢桿菌Candida sp.
嗜異生質菌Saccharomyces cerevisiae
貝倫格葡萄座腔菌梨生?;?/span>Saccharomyces sp.
嗜水氣單胞菌Saccharomyces cerevisiae
間型脈孢菌Saccharomyces sp.
核盤菌 Saccharomyces cerevisiae
小鼠α葡萄糖苷(α-glucosidase)免疫試劑盒BEND6蛋白抗體人流行性腮腺炎(EP)山梔苷
小鼠α-黑色激(α-MSH)免疫試劑盒胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體人流行性腮腺炎(EP)山梔苷甲酯
小鼠αS轉移(α-GST)免疫試劑盒巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白2抗體人抗流行性出血熱病抗體IgG (EHF)山梔子苷B
小鼠α甘露糖苷(α Manase)免疫試劑盒巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白5抗體人抗流行性出血熱病抗體IgG (EHF)山茱萸苷
cathepsin B抑制劑(CA-074)STMN3 英文名稱: 原癌基因18家族STMN3蛋白抗體 0.1ml
EMR1 英文名稱: 表皮生長因子樣激素受體1抗體 0.1ml
鼠抗人前列腺特異性抗原抗體 Anti-PSA 0.2ml
Anti-Syntrophins/SNTA1/Syntrophin α1/FITC 熒光素標記神經肌肉接頭蛋白SNTA1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MKK7 (Ser271/Thr275) 磷酸化原活化蛋白激酶MKK7抗體 規(guī)格 0.1ml
HEV 戊型肝炎病毒(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg