細胞實驗中支原體污染是較為麻煩的問題,困擾著很多科研人。今天跟大家分享的是實驗室支原體檢測方法。
培養(yǎng)法:使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測樣品(細胞培養(yǎng)上清等),經(jīng)過約7-21天的培養(yǎng),觀察有無支原體的生長,以此來判斷細胞培養(yǎng)基中有無支原體存在。該方法雖然經(jīng)濟可靠,但實驗周期較長,所以常用來進行對懷疑細胞的最后甄別。
熒光指示細胞法:該方法較為快捷,方法簡單,但其靈敏度有一定的欠缺,易造成漏檢。
PCR法:PCR 法檢測支原體的方法最為快速、靈敏、取樣量少,既可做細胞本身,也可做細胞上清的檢測,同時可以檢測多種支原體的污染,是目前常用的檢測手段。但其成本較高,條件要求嚴格,且有時易出現(xiàn)假陽性或假陰性。彌補的方法是對懷疑的樣品要經(jīng)過3 次PCR 檢測,或用培養(yǎng)法檢測。
DNA染色法:使用DNA染色試劑(如:Hoechst 33258)對細胞進行染色,由于支原體中的核酸也可以被著色,所以,如果有支原體污染,會在細胞表面或者培養(yǎng)基中見到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒,與細胞核呈現(xiàn)的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對比。
不同的實驗室可根據(jù)具體情況選擇不同的方法或幾種方法聯(lián)合使用以保證檢測的準確性和靈敏度。