概念：

原代細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞?？寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

基本步驟：

1、取對數(shù)生長期的各組細胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞，并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。

2、將細胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3周。

3、經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液，加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10～30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。

4、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計數(shù)克隆，或在顯微鏡（低倍鏡）計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù)。zui后計算克隆形成率。

克隆形成率 =（克隆數(shù)/接種細胞數(shù)）×100%

平板克隆形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的原代細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。

552-46-5 1-萘胺鹽酸鹽;1-氨基萘鹽酸鹽; α-萘胺鹽酸鹽 英文名稱： CAS號： 1-NaphthylaMine hydrochloride;1-AMinonaphthalene hydrochloride;

90-15-3 1-萘酚;α-萘酚;α-羥基萘;1-羥基萘 英文名稱： CAS號： 1-Naphthol;1-Naphthalenol;α-Hydroxynaphthalene;1-Hydroxynaphthalene

330581-20-9 1-萘酚-3,6-二磺酸鈉 英文名稱： CAS號： 1-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodiuM salt hydrate

596-01-0 1-萘酚酞;α-萘酚酞 英文名稱： CAS號： 1-Naphtholphthalein;α-Naphtholphthalein;p-α-Naphtholphthalein;3,3-Bis(4-hydroxy-1-naphthyl)-phthalide

13922-41-3 1-萘基硼酸 英文名稱： CAS號： 1-Naphthylboronic acid

66-77-3 1-萘甲醛;α-萘甲醛 英文名稱： CAS號： 1-Naphthaldehyde;

86-55-5 1-萘甲酸;α-萘甲酸;1-萘羧酸 英文名稱： CAS號： 1-Naphthoic acid;Naphthalene-1-carboxylic acid

879-18-5 1-萘甲酰氯 英文名稱： CAS號： 1-Naphthoyl chloride
原代細胞