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購買的細胞存活率不佳可能原因是什么?

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1購買的原代細胞出現死亡或細胞存活率不佳可能原因是什么?
問&答-------------------------------------------
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質不佳。胎牛血清使用錯誤或胎牛血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80℃太久。

2購買的細胞冷凍管經解凍后,為什么會發(fā)生細胞數目太少的情形?
問&答-------------------------------------------
研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現細胞數目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷, 以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。

3培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?
問&答-------------------------------------------
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

4什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?
問&答-------------------------------------------
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

5L-谷氨酰胺在原代細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?
問&答-------------------------------------------
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

6GlutaGRO-I(corning 25-015-CI)是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaGRO-I?這個二肽有多穩(wěn)定?
問&答-------------------------------------------
GlutaGRO-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaGRO-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘, GlutaGRO-I二肽溶液有zui小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

7Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle’s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別?
問&答-------------------------------------------
HBS和EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,如果僅僅是清洗將要在原代細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。

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