用纖連蛋白包被細(xì)胞培養(yǎng)板時(shí)，在分化前一天，將1ml纖連蛋白(10μg／ml)加入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板(1ml／孔)，使其均勻分布在孔內(nèi)。置于4℃過夜，使用時(shí)，提前2小時(shí)放于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。EPC分化用的培養(yǎng)基主要有兩種，一種是M199，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)自己添加VEGF、IGF、bFGF等因子，并且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果自行調(diào)整；另一種是商品化的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基EGM2或EGM2MV，提供VEGF、IGF、EGF、bFGF的混合物，雖然使用方便，但是這些因子的具體濃度未知，對(duì)于實(shí)驗(yàn)的調(diào)整有局限性。

小鼠Lin-Scal+內(nèi)皮祖細(xì)胞大約是6×106細(xì)胞／孔加入到纖連蛋白包被的6孔板中，進(jìn)行分化，每?jī)商鞊Q一次液(4ml／孔)，可在分化的0、3、7、10、14天用相差顯微鏡觀察其形態(tài)變化，并用流式檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志物的變化。通常這些細(xì)胞zui初為懸浮狀態(tài)(0～3天)，在一周內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘟切渭?xì)胞，并逐漸貼壁。細(xì)胞逐漸增殖，2周時(shí)長(zhǎng)滿。

0～3天時(shí)，細(xì)胞高表達(dá)造血內(nèi)皮祖細(xì)胞表面標(biāo)志物(Sea-1、CD117和AC133)，微量表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)。此后，細(xì)胞逐漸失去造血內(nèi)皮祖細(xì)胞表面標(biāo)志物，增加內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)的表達(dá)。到第14天時(shí)，細(xì)胞喪失造血內(nèi)皮祖細(xì)胞表面標(biāo)志物(Sea-1、CD117和AC133)，大量表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物(Flk-1、Tie-2、E-selectin)，暗示EPCs分化為內(nèi)皮細(xì)胞。圖7-4-2是小鼠Lin-Scal+‘內(nèi)皮祖細(xì)胞分化前后的特征。