Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法

時間：2021/3/11閱讀：1060

1、取1ml蛋白標準配置液加入到25mgBSA的蛋白標準管中，*溶解蛋白標準品，即為25mg/ml的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液可-20℃長期保存。

2、取適量25mg/ml蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標準品與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見，通常使用 0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。

3、做標準曲線。將標準品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加標準品稀釋液補足到20ul。

4、將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測樣品總體積也為20ul。

5、每孔加入考馬斯亮藍G250溶液200ul，充分混勻（可將酶標板放在振蕩器上振蕩30s），室溫放置3-5min后，以標準曲線0號做參比，在 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。以標準品蛋白含量（ug）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。

6、如用分光光度計測定，請在第三步的時候?qū)藴势敷w積改為1ml，濃度梯度用生理鹽水稀釋為0，1，2，5，10，15，30ug/ml?；蚋鶕?jù)樣品調(diào)整濃度梯度。

7、將樣品稀釋至合適濃度，加到小試管中，使待測樣品總體積也為1ml。

8、每只試管加考馬斯亮藍G250溶液3ml，充分混勻，室溫放置3-5min后，以標準曲線0號做參比，在 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。

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