蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP)

NP; PUNP; Nucleoside Phosphorylase; Inosine phosphorylase; Inosine-guanosine phosphorylase

型號：GOY-01D2364

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：細胞質(zhì)

預(yù)測分子量：35.8kDa

實際分子量：36kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Met1~Ser289 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：6.5

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)重組蛋白英文名稱：Recombinant Lysophospholipase III (LYPLA3)PLA2G15; ACS; LLPL; LPLA2; GXVPLA2; Lysosomal Phospholipase A2; Group XV Phospholipase A2; 1-O-acylceramide synthase; LCAT-like lysophospholipase物種：Mouse，小鼠

通道激活1(CAP1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Channel Activating Protease 1 (CAP1)PRSS8; Prostasin; Protease, Serine 8物種：Rat，大鼠

N-?；拾贝减０匪饷?(ASAH2)真核蛋白英文名稱：Eukaryotic N-Acylsphingosine Amidohydrolase 2 (ASAH2)HNAC1; non-lysosomal ceramidase; Neutral ceramidase物種：Human，人

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini厚垣孢普可尼亞菌 Pochonia chlamydosporia

茄尼（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 Solanesol

 COLO 201(人結(jié)直腸腺細胞)HSC-T6(大鼠肝星形細胞)

大波斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside

 根瘤菌 Rhizobium sp.香菇 Lentinula edodes

秦皮甲素（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Esculin

 植物桿菌 Lactobacillus plantarum粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

秦皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Fraxin

 大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細胞培養(yǎng)基人直腸平滑肌細胞培養(yǎng)基

秦皮甲素 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,BR Esculin

 曲霉屬 Aspergillus sp.人結(jié)腸平滑肌細胞培養(yǎng)基

秦皮素（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Fraxetin

 地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis洛格酵母 Saccharomyces logos

秦皮乙素（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 6,7-Dihydroxycoumarin

 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum喜鹽芽胞桿菌 Halobacillus sp.

秦皮乙素；6,7-二羥基素；七葉亭 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98% 6,7-Dihydroxycoumarin

嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)重組蛋白人10uL AP標(biāo)記的抗抗體 Anti Biotin Ab,AP 4℃保存

5g 天狼猩紅 Sirius Rosa BB 室溫保存

弧菌檢驗檢驗培養(yǎng)基  

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)免疫試劑盒進口、組裝

Honda氏產(chǎn)毒肉湯 Honda Toxin-Producing Broth 250g

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒 Tryptose Soya Agar 300ml/袋*10

1瓶 NRK-52E細胞株 NRK-52E 低溫運輸和保存

RV肉湯 RV Broth 10ml*20支/包

丙二酸鈉培養(yǎng)基 Malonate Broth 10

200mg L-NAME（eNOS抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

100g 瓊脂糖 Agarose 4℃保存