蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Neprilysin (CD10)

NEP; MME; CALLA; SFE; Atriopeptidase; Enkephalinase; Skin fibroblast elastase; Common Acute Lymphoblastic Leukemia Antigen; Membrane Metallo-Endopeptidase

型號：GOY-01D1911

酶與激酶

神經(jīng)科學(xué)

物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

來源：原核表達

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：n/a

預(yù)測分子量：-

實際分子量：-(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：-

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白英文名稱：Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)GPMM; Phosphorylase,Glycogen; McArdle Syndrome,Glycogen Storage Disease Type V; Myophosphorylase物種：Human，人

基質(zhì)金屬12(MMP12)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 12 (MMP12)MME; HME; ME; Macrophage Metalloelastase; Macrophage Elastase物種：Human，人

弗林(FUR)重組蛋白英文名稱：Recombinant Furin (FUR)PACE; PCSK3; SPC1; Paired Basic Amino Acid Cleaving Enzyme; Dibasic-processing enzyme物種：Mouse，小鼠

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

磷酸化表皮生長因子受體抗體 phospho-EGFR (Tyr1172) 0.1ml

磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體 phospho-ERK5(Ser496) 0.1ml

載脂蛋白A5抗體 APOA5 0.2ml

12脂氧合酶抗體 ALOX12/12 Lipoxygenase 0.1ml

腺苷酸環(huán)化酶3抗體 ADCY3 0.2ml

CD44抗體 CD44/HCAM/PGP1 0.1ml

半乳糖腦苷脂酶抗體 Galc 0.1ml

磷酸化相似腫瘤抑制基因HUGL抗體 phospho-LLGL1 + LLGL2(Ser650+Ser654) 0.1ml

骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體 Sclerostin 0.2ml

細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體 Caveolin-2 0.1ml

鋅轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 ZnT-1 0.2ml

S100鈣結(jié)合蛋白A7抗體 S100A7/Psoriasin 0.2ml

腦啡肽酶(CD10)重組蛋白小鼠蛹蟲草（北冬蟲夏草、北蟲草）   

厚孢根霉   產(chǎn)延胡索酸。

釀酒酵母   釀造果酒（白梨）

蘇云金芽孢桿菌   殺鱗翅目昆蟲

米根霉   產(chǎn)乳酸

直立毛霉   

貝雷絲孢酵母   飼料酵母

吸水鏈霉菌紫色變種   

鏈格孢   除光學(xué)儀器外的防霉試驗菌種。

巨大芽孢桿菌   細菌肥料

裂褶菌   產(chǎn)L-蘋

蕁麻青霉   產(chǎn)灰黃

煙曲霉