中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-NS5A說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  CHO-HCV-NS5A細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的NS5A基因，能穩(wěn)定表達(dá)NS5A蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。 
培養(yǎng)條件  DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C19
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

天門冬氨酸洛美沙星    分子式：    484.453    分子量：     C17H19F2N3O3.C4    英文名稱：    Lomefloxacin aspartate    CAS號(hào)：    211690-33-4    
 雙酚AF    分子式：    336.23    分子量：     C15H10F6O2    英文名稱：    Bisphenol AF    CAS號(hào)：    1478-61-1    
 溴甲酚綠    分子式：    698.01    分子量：     C21H14Br4O5S    英文名稱：    Bromocresol green    CAS號(hào)：    76-60-8    
 酚酞    分子式：    318.33    分子量：     C20H14O4    英文名稱：    Phenolphthalein    CAS號(hào)：    77-09-8-    
 分散橙 1    分子式：    318.33    分子量：     C18H14N4O2    英文名稱：    Disperse orange 1    CAS號(hào)：    2581-69-3    
 堿性品紅    分子式：    337.85    分子量：     C20H20ClN3    英文名稱：    Fuchsin    CAS號(hào)：    632-99-5    
 二十八酸    分子式：    424.74    分子量：     C28H56O2    英文名稱：    Twenty-eight acid    CAS號(hào)：    506-48-9    
 2,3-二氯丙烯    分子式：    110.97    分子量：     C3H4Cl2    英文名稱：    2,3- two chloride    CAS號(hào)：    78-88-6    
 己烷雌酚    分子式：    270.37    分子量：     C18H22O2    英文名稱：    Hexoestrol    CAS號(hào)：    84-16-2    
 環(huán)黃芪醇    分子式：    490.71    分子量：     C30H50O5    英文名稱：    Ring of Astragalus    CAS號(hào)：    84605-18-5    
 曲安西龍    分子式：    434.5    分子量：     C24H31FO6    英文名稱：    Qu Anxilong    CAS號(hào)：    124-94-7    
 加巴噴丁鹽酸鹽    分子式：    207.7    分子量：     C9H18ClNO2    英文名稱：    Gabapentin hydrochloride    CAS號(hào)：    60142-96-3  人白細(xì)胞分離液 1.078    120906-200    200mL
柱式酵母質(zhì)粒 DNAout    70202-50    50 次
250U    熱啟動(dòng) Tth DNA 聚合酶    
50 次    磁珠血液 DNAout    
30 次    一管式 DNA 膠回收試劑盒    
200mL    小鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.071    
活性氧檢測(cè)試劑盒    18-0380-100    100 次
RNA 電泳液 ,10×    3150-100    100mL
100μL    山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記    
100g    DNA  Guanidine HCl( 鹽酸胍 )    
250mL    非凍型細(xì) RNA 保存液    
1mL    TG1 種    
Therminator II DNA 聚合酶    131196-100    100U
電泳甘油    90503-100    100mL
200U    T4 DNA 連接酶    
1mL    蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2    
0.1mL×10    HB101 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞    
1000μL    小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗    
Xa 因子蛋白酶    120507-25    25μg
dATP 溶液，100mM    120615-0.5    0.5mL
500g    鐵氰化