雜交瘤細(xì)胞株；F7-P-01說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；F7-P-01說明書
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

C11orf65  11號染色體開放閱讀框65抗體規(guī)格: 0.2ml
Bacillus anthraci protein  炭疽桿菌菌體蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-MEF2A (Thr312)  磷酸化肌細(xì)胞增強因子2抗體規(guī)格: 0.1ml
BAALC  腦和急性白血病胞漿蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
NOX4/NADPH oxidase 4  NADPH氧化酶4抗體 0.1ml
Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶8抗體規(guī)格: 0.1ml
BCL7C  B細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體規(guī)格: 0.2ml
ADAMTS2  整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶2型抗體 0.2ml
Laminin B2 gamma 1  層粘連蛋白B2γ1抗體規(guī)格: 0.1ml
ASH1L  ASH1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Cytosine deaminase  胞嘧啶脫氨酶抗體 0.2ml
Phospho-KSR1 (Ser392)  磷酸化Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
RBM26  RNA結(jié)合蛋白26抗體規(guī)格: 0.2ml
14-3-3 family protein  蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml
phospho-IRS-1(Ser307)  磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體規(guī)格: 0.1ml
C9ORF46  9號染色體開放閱讀框46抗體規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的驢抗人IgG規(guī)格: 0.1ml
IL-28A/IFNL2  白細(xì)胞介素28A抗體規(guī)格: 0.2ml
DCAF12/WDR40A  睪中心體相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml50 次        高載量 PCR 片段純化試劑盒
1000μL        小鼠抗 SUMO 標(biāo)簽蛋白單抗
人玻連蛋白    100μg    130874-100
即用型 PCR 試劑盒 3.0    1 mL    90805-1
100mL        吐溫 -80
1mg        Forskolin( 苷酸環(huán)化酶激活劑 )
5g        氨基 10B
50 次        柱式白色念珠菌 RNAout
可溶性兩性 B    25mg    CAS1397-89-3
加 T 試劑盒    50 次    60106-50
1mL        纖連蛋白 ( 人血 )
3000U        谷氨酸脫氫酶
1g        牛磺酸脫氧膽酸
50 次        柱式血清血漿 RNAout
脫氧核糖核酸酶 ( 牛胰 )    25mg    CAS9003-98-9
Origami B 菌種    1mL    12-207
1g        洋紅
1mg        JC-1