雜交瘤細(xì)胞株；1B3說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；1B3說明書
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Rabbit Anti-human IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗人IgG規(guī)格: 0.1ml
Phospho-HER2(Tyr1112)  磷酸化HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
DVL2  蓬亂蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗羊IgG規(guī)格: 0.1ml
phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216)  磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體規(guī)格: 0.1ml
Salmonella enteritidis H  傷寒沙門氏菌鞭毛抗原H抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
HBEX2/Bex1  腦組織表達(dá)X連鎖蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
ELL  聚合酶延伸因子抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗牛IgG規(guī)格: 0.1ml
NFEM5/IRF4/MUM1  淋巴細(xì)胞特異性干擾素調(diào)節(jié)因子抗體規(guī)格: 0.2ml
HEBP2  Heme結(jié)合蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgM規(guī)格: 0.1ml
FRA2/FOSL2  FRA2/FOSL2抗體規(guī)格: 0.1ml
SRXN1  硫氧還蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-rabbit IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗兔IgG規(guī)格: 0.1ml
FAS/Apo-1/CD95  載脂蛋白A1抗體規(guī)格: 0.1ml
FRMD4B  FRMD4B蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-chicken IgG  兔抗雞IgG規(guī)格: 1mg
eIF3A  真核翻譯起始因子3A抗體規(guī)格: 0.1ml
beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽1-40(C端)抗體規(guī)格: 0.1ml
Melamine  三聚氰胺抗體規(guī)格: 0.2ml
Nadrin  神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育相關(guān)調(diào)控蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml2000U        XhoI
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶    500 U    CAS9000-97-9
HRP 標(biāo)記內(nèi)參抗體 (β-actin)    20μL    130592-20
動物 RNAout(TRIzol)     250mL    3070-250
50 次        膜結(jié)合 DNA 清除試劑盒
25 OD        3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽結(jié)構(gòu)類似物
5mL        角質(zhì)細(xì)胞生長因子 - 不含 BPE
250mg        潮 B 干粉
卵巢上皮細(xì)胞生長因子    5mL    21-0210-5 
RNase-free Sarkosyl 溶液 ,10%    100mL    100890-100
1mL        PCR 抑制物清除劑
1個        暗盒 (5×7 英寸 )
1mg        H-89(PKA 抑制劑 )
10g        RNA  DTT ( 二硫代蘇糖醇 )
Insulin    18mg    23-0330-18
柱式糞便 DNAout    50 次    80102-50
100mL        RIPA 裂解液 ( 強(qiáng) )
10 次        ConA 糖蛋白分離試劑盒
50 次        DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)λ/EcoR I+ Hind III
100mL        MAL 指示劑培養(yǎng)基
熒光胺    25mg    CAS38183-12-9
親和層析柱    30 mL    140652-1
100 次        真菌種屬鑒定 PCR Mix 1
1g        鄰聯(lián)茴香胺
1g        2,6- 二氯酚靛酚
50mg        Cisplatin(DNA 交聯(lián)劑 / 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑 )