人孤腓肽（OFQ/N）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。α1酸性糖蛋白2抗體（類粘蛋白2）Alpha 1 acid glycoprotein 2 0.2ml

磷酸化水通道蛋白2抗體phospho-AQP2(Ser264+261) 0.1ml

細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體ATTY 0.2ml

抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體Vasopressin 0.1ml

ATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體ABCF1 0.1ml

醛糖還原酶抗體AKR1B1 0.2ml

人血清白蛋白抗體Serum albumin 0.1ml

活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體ATF4 0.1ml

腺苷酸激酶-1抗體Adenylate Kinase 1 0.2ml

纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體F-Actin 0.1ml

聚集蛋白抗體Agrin 0.1ml

調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體AIF 0.1ml

調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體AIF 0.1ml

間變型淋巴瘤激酶抗體ALK 0.2ml

膜粘連蛋白A1抗體Annexin A1 0.1ml