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藥典級牛津杯測定抗生素的抑菌實驗
藥典級牛津杯測定抗生素的抑菌實驗
一、目的：觀察抗生素的抑菌效果，掌握藥典級牛津杯體外測定抗生素的抗菌活性。
二、原理： 抗生素從孔洞向瓊脂培養(yǎng)基擴散滲透，通過對試驗菌的抑殺作用而影響細菌生長繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小確定抗生素抗菌能力的強弱。
三、材料
1. 菌種：金黃色葡萄球菌，用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)16~18 h得到的菌液。
2. 藥品：氨芐青霉素，肉湯培養(yǎng)基。
3. 器材：藥典級牛津杯、涂布棒、生化培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、水浴鍋、滅菌肉湯瓊脂培養(yǎng)基、酒精燈、平皿、吸管、0.5cm紙片、鑷子、記號筆、尺子等。
四、實驗步驟
1.按照培養(yǎng)基的配制方法步驟配制好肉湯培養(yǎng)基，并在121℃，滅菌20 min后，放在60 ℃水浴鍋中保溫，注意溫度恒定，不要讓培養(yǎng)基凝固。
2. 將用于試驗的防腐劑（抑菌物質）配制成2個所需的濃度（10ug/ml,30ug/ml）。
3.將已經(jīng)培養(yǎng)好的菌制成一定濃度（106cfu/mL）的懸浮液，用移液管移取1 mL該菌懸液至滅過菌的（121℃，20分鐘）培養(yǎng)皿中，倒入15 mL已滅菌的培養(yǎng)基（溫度約45℃，用手摸瓶壁不感覺燙手即可），輕輕轉動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與菌液混勻，靜置凝成平板。
4.將凝固后的平板用滅菌后的打孔器在平板上打孔（4個孔洞），并挑出培養(yǎng)基。（或將已滅菌的藥典級牛津杯依次輕輕放置在平板上）
5.按照順時針方向依次在每個孔洞（或藥典級牛津杯）中加入抑菌劑，以無菌水做空白對照，每種抑菌劑的濃度做三個平行樣。
6.在37 ℃下培養(yǎng)24 h觀察，用尺子測量抑菌圈的大小。
五、注意事項
1.應在無菌條件下操作，試驗完畢后及時滅菌處理。
2.添加抑菌劑的時候注意滴到其他地方，以免影響觀察。