DNA 含量檢測試劑盒（細(xì)胞周期）
DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)
規(guī)格：20T/50T
保存：-20℃避光保存，一年有效。
產(chǎn)品說明：
細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過
程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時平均分配到兩個子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期
和有絲分裂期，細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA 合成前期（G1），DNA 合成期（S），DNA 合成后期G2），整個周期可表示為 G1→S→G2→M。DNA 周期檢測可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi) DNA 能夠和熒光染料（如碘化丙啶 PI）結(jié)合的特性，細(xì)胞各個時期其 DNA 含量不同而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測的熒光強度也不一樣。細(xì)胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。
在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞
凋亡的晚期，前向角和 90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化來觀察
凋亡細(xì)胞。用 PI 對細(xì)胞進行染色，凋亡細(xì)胞由于總 DNA 量降低，于正常 G0/G1 細(xì)胞群前出現(xiàn) DNA 低染細(xì)
胞群，即 G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）,即細(xì)胞凋亡群。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮、貼壁）的 DNA 含量（細(xì)胞周期）檢測。
試劑盒組成：
試劑名稱 20T 50T 保存條件
RNase A 2.0mL 5.0mL -20℃
PI 染色液 8.0mL 20.0mL -20℃避光
使用方法：（僅供參考）
1， 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時設(shè)立陰性對照組，并收集細(xì)胞。
2， 用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，1500rpm，5min 離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×106 /ml,取 1ml 單細(xì)胞懸液。
3， 制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，在細(xì)胞中加入 70%預(yù)冷乙醇 500ul 固定 2 小時至過夜，4℃保
存，染色前用 PBS 洗去固定液；如需要，細(xì)胞懸液可用 200 目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次。
4， 細(xì)胞沉淀中加 100µl RNase A 溶液，重懸細(xì)胞，37℃水浴 30min。
5， 再加入 400µl PI 染色液混勻，4℃避光孵育 30min。
6， 上機檢測，記錄激發(fā)波長 488nm 處紅色熒光。
注意事項：
碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。
PI 有毒，操作時應(yīng)戴手套，并避免污染。
熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。
