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關(guān)于核酸電泳的原理知識(shí)
閱讀：4766發(fā)布時(shí)間：2022-2-28
原理：
凝膠電泳的原理比較簡(jiǎn)單。當(dāng)一種帶電分子放在電場(chǎng)當(dāng)中時(shí)，它們就會(huì)以一-定的速度移向適當(dāng)?shù)碾姌O。帶點(diǎn)分子在電場(chǎng)作用下的移動(dòng)速度，稱(chēng)之為電泳遷移率，它同電場(chǎng)的強(qiáng)度和電泳分子本身攜帶的靜電荷數(shù)成正比。也就是說(shuō)，電場(chǎng)強(qiáng)度越大，電泳分子所攜帶的靜電荷越多，其移動(dòng)速度也就越快，反之則慢。在哪電泳中，使用無(wú)反應(yīng)活性的瓊脂糖與聚丙烯酰胺凝膠作支持介質(zhì)，從而將電泳分子的對(duì)流運(yùn)動(dòng)降低到極低，使電泳分子的移動(dòng)速度與其分子的摩擦系數(shù)成反比。已知摩擦系數(shù)是分子大小、極性及介質(zhì)黏度的函數(shù)，因此根據(jù)分子大小的不同、構(gòu)型或形狀的差異，以及所帶凈電荷的多寡，便可以通過(guò)電泳將核酸或蛋白質(zhì)分子混合物中的各種成
分彼此分離開(kāi)來(lái)。
凝膠電泳的原理比較簡(jiǎn)單。當(dāng)一種帶電分子放在電場(chǎng)當(dāng)中時(shí)，它們就會(huì)以一定的速度移向適當(dāng)?shù)碾姌O。帶點(diǎn)分子在電場(chǎng)作用下的移動(dòng)速度，稱(chēng)之為電泳遷移率，它同電場(chǎng)的強(qiáng)度和電泳分子本身攜帶的靜電荷數(shù)成正比。也就是說(shuō)，電場(chǎng)強(qiáng)度越大，電泳分子所攜帶的靜電荷越多，其移動(dòng)速度也就越快，反之則慢。在哪電泳中，使用無(wú)反應(yīng)活性的瓊脂糖與聚丙烯酰胺凝膠作支持介質(zhì)，從而將電泳分子的對(duì)流運(yùn)動(dòng)降低到極低，使電泳分子的移動(dòng)速度與其分子的摩擦系數(shù)成反比。已知摩擦系數(shù)是分子大小、極性及介質(zhì)黏度的函數(shù)，因此根據(jù)分子大小的不同、構(gòu)型或形狀的差異，以及所帶凈電荷的多寡，便可以通過(guò)電泳將核酸或蛋白質(zhì)分子混合物中的各種成分彼此分離開(kāi)來(lái)。
分類(lèi)：
一.瓊脂凝膠電泳( 分辨DNA范圍為0.2~50kb)
二.聚丙烯酰胺凝膠電泳(分辨范圍為1~1000kb )
三:脈沖電場(chǎng)凝膠電泳( 分離到高達(dá)107bp的DNA大分子)
瓊脂糖凝膠電泳是尤為常用的小片段核酸前，用于分離鑒定和純化DNA或RNA。
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一-種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。凝膠的分辨能力同凝膠的類(lèi)型和濃度有關(guān)。分辨DNA范圍0.2~50kb;而要分辨較小分子質(zhì)量的DNA，則要用聚丙烯酰胺凝膠，其分辨范圍為1~1000bp。凝膠濃度的高低影響凝膠介質(zhì)孔隙的大小，濃度越高，孔隙越小，其分辨能力也就越強(qiáng);反之，濃度越低，孔隙就增大，其分辨能力也就越弱。
實(shí)驗(yàn)大致步驟：配膠、EB染色、點(diǎn)樣、電泳、成像拍照、膠圖分析
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