 | 紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司 |
11
15021010459
當前位置：首頁>>技術(shù)中心>>技術(shù)文章>>看完這些你就知道選擇流式抗體的注意事項是什么了
在線溝通：
顏先生 （銷售）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機：
- 15021010459
- 傳真：
- 聯(lián)系我時，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個性化：
- www.hyrmb.com.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://www.hbwxwy.cn/st321032/
- 公司網(wǎng)站：
- www.hyrmb.com
看完這些你就知道選擇流式抗體的注意事項是什么了
閱讀：6441發(fā)布時間：2020-5-27
流式細胞術(shù)是一項非常實用的技術(shù)，其特點是方便快捷，結(jié)果準確，且能成功的對目標細胞進行分選，但是提起流式抗體具體要怎么選，估計很多小伙伴都會犯難，實驗前需要考慮的是流式抗體的選擇和熒光素的搭配，那么接下來就給大家分享一下在選擇流式抗體時有哪些注意事項吧。
選流式抗體需注意哪些問題?
1、抗體的基本要求
a. 清楚知道待測靶標是胞內(nèi)還是胞外蛋白;
b. 嚴格按照樣品來源選擇抗體反應(yīng)性;
c. 必須選擇明確標注可用于流式實驗的抗體，不能用普通抗體代替。
2、流式細胞儀的要求
a.了解所用的流式細胞儀有幾個激光器，常見的激光器有405nm、488nm和633nm等，目前大部分的流式細胞儀都配有488nm和633nm2個激光器;
b. 知道每個激光器下有幾個檢測通道，通道數(shù)決定一次多測多少個指標;
3、熒光標記的選擇
a. 有直標抗體的話，盡量選直標，間接標記二抗增加實驗步驟，多次清洗造成會細胞損失，染色準確性也低;
b. 弱表達靶標，盡量選擇強熒光素標記抗體，PE>APC>FITC>PerCP。
4、多色搭配方案
a. 每個通道只能用一種標記，如FITC和AF488，兩種標記的激發(fā)波長和發(fā)射波長均相近，所以不能同時用這兩種標記;
b. 盡量減少光譜重疊，如PE-cy5和APC，兩者同用時調(diào)補償值過大;
c. 弱靶標配強熒光素，如Treg細胞中CD4表達量高于FoxP3，所以FoxP3應(yīng)使用強熒光素標記抗體;
d. 五色及以上配色建議查閱文獻，或者咨詢抗體廠商。
5、如何調(diào)補償?
多色流式實驗，由于各個熒光素存在光譜的重疊，因此需要進行補償調(diào)節(jié)，在550nm附近，兩種染料存在光譜重疊。
下圖為CD3-FITC，CD4-PE的染色補償調(diào)節(jié)過程，調(diào)補償簡單的一個詞就是：“橫平豎直”，慢慢理解哦!
6、同型對照?
同型對照的目的是為了減少背景干擾，更好展現(xiàn)抗原與抗體的結(jié)合強度，尤其對于一些胞內(nèi)蛋白、低表達或連續(xù)表達蛋白，同型對照的設(shè)置顯得尤為必要。同型對照需要選擇與染色的單克隆抗體相同種屬來源，相同抗體亞型，相同熒光標記的抗體。
紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司主營產(chǎn)品：BD全血RNA采血管-分子診斷供應(yīng)商
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.hbwxwy.cn, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責，化工儀器網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
