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　　LC/MS/MS系統(tǒng)愈來愈多地受到人們的重視，一些的分析儀器公司和研究機構建立多個研究實驗室參于研究開發(fā)?？傊?，為應用目的而建立的LC/MS/MS系統(tǒng)會越來越多，應用研究課題也會越來越多。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)已成為現(xiàn)代分析手段中*的組成部分。LC／MS的聯(lián)用始于70年代，90年代以來，由于大氣壓電離的成功應用以及質譜本身的發(fā)展，液相色譜與質譜的聯(lián)用，特別是與串聯(lián)質譜(MS/MS)的聯(lián)用得到了極大的重視和發(fā)展。LC-MS／MS聯(lián)用的優(yōu)點非常顯著，因為氣相色譜只能分離易揮發(fā)且不分解的物質，而液相色譜則把分離范圍大大拓寬了，生物大分子也能分離，LC與高選擇性、高靈敏度的MS／MS結合，可對復雜樣品進行實時分析，即使在LC難分離的情況下，只要通過MS1及MS2對目標化合物進行中性碎片掃描，則可發(fā)現(xiàn)并突出混和物中的目標化合物，顯著提高信噪比。

　　液-質聯(lián)用是通過一個“接口”來實現(xiàn)的。在接口研制方面，前后發(fā)展了有20多種，其中主要有直接導入界面、傳送帶界面、滲透薄膜界面、熱噴霧界面和粒子束界面，但這些技術都有不同方面的限制和缺陷，直到大氣壓電離技術成熟后，液-質聯(lián)用才得以迅速發(fā)展，成為科研和日常分析的有力工具。2接口基本原理

　　有關各種電離技術文獻已有評述，目前主要采用大氣壓電離(API)技術，API包括電噴霧電離(跚)和大氣壓化學電離(APCI)。

　　2．1電噴霧電離(ESI)

　　溶液中樣品流出毛細管噴口后，在霧化氣(N2)和強電場(3～6kV)作用下，溶液迅速霧化并產(chǎn)生高電荷液滴。隨著液滴的揮發(fā)，電場增強，離子向液滴表面移動并從表面揮發(fā)，產(chǎn)生單電荷或多電荷離子。通常小分子得[M+H]+或[M-H]-單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，由于質譜儀測量的是質，荷比(m/z)，可測定的生物大分子的質量數(shù)高達幾十萬。

　　ESI是很軟的電離，可直接測定熱不穩(wěn)定的極性化合物，多電荷形成可分析蛋白質和DNA等生物大分子，調節(jié)離子源(源內(nèi)ID))電壓可以控制離子的斷裂，給出結構信息。

　　2．2大氣壓化學電離(APCI)

　　溶液中樣品流出毛細管后仍由氮氣流霧化到加熱管中被揮發(fā)，在加熱管端的Corona放電電極(zui初利用同位素Ni的電子放射)使溶劑分子形成反應氣等離子體。樣品分子與等離子體通過氫質子交換被電離，形成[M+H]+或[M-H]-，并進入質譜儀。

　　APCI也是很軟的電離，只產(chǎn)生單電荷峰，適合測定弱極性的小分子化合物。另外，它適應高流量的梯度洗脫，高低水溶液變換的流動相。通過調節(jié)離子源電壓，可以得到不同斷裂的質譜圖。

　　2．3接口形式

　　接口是液-質聯(lián)用的關鍵部分，在這里完成溶液的氣化和樣品分子的電離。由于大量生物樣品的背景基底非常復雜，即使經(jīng)過分離，還會很“臟”。因此在接口設計時，既要考慮離子化的效率，亦要考慮接口的抗污染和耐用。圖給出了幾種不同的API“接口”形式，采用Z字形通道離子束引進系統(tǒng)，避免了中性或非揮發(fā)性物質直接進入采樣孔，可有效地防止接口的玷污。3應用

　　LC/MS/MS系統(tǒng)是繼GC／MS聯(lián)用之后又一新興的分離檢測技術，近來發(fā)展極為迅速。它在生命科學、環(huán)境科學、法醫(yī)學、商檢等領域得到了廣泛應用。

　　3．1藥物及體內(nèi)藥物分析

　　藥物的是用來預防、診斷及治療疾病的一類特殊物質，與人們的健康和生命安危有極其密切的關系，雜質檢查及其限度控制是保證藥品質量的一個重要方面。使用LC/MS/MS系統(tǒng)可以簡便地對藥物中雜質加以監(jiān)控。Nicolas對抗癌藥物DuP941生產(chǎn)中有關雜質建立了LC/MS/MS系統(tǒng)指紋圖譜，不同生產(chǎn)的批次藥物與已建立的譜圖對照，從而達到質量控制目的。Zhao鑒別和測定了氯沙坦片劑在儲存過程中產(chǎn)生的微量降解產(chǎn)物。Rourick建立了鑒定藥品雜質及降解產(chǎn)物的LC/MS/MS系統(tǒng)方法，如頭孢羥氨芐通過酸堿或加熱處理使其降解，然后反相C18柱分離，利用MS／MS功能來鑒定雜質及降解產(chǎn)物的化學結構。

　　體內(nèi)藥物分析是測定體液(主要是血漿、血清或全血)中藥物或其他代謝物濃度。由于血液樣品試樣提供量少，基質復雜，在此混合物中分析某種微量成分(通常為(g/mL或ng/mL水平)并加以鑒別，常常是對分析化學家的挑戰(zhàn)。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)雖然有足夠的靈敏度，但遇到LC難以分離的組分，其應用受到限制。使用LC-MS／MS可以克服背景干擾，通過MS／MS的選擇反應控制模式(SRM)或多反應檢測模式(SRM)，提高信噪比，因此對復雜樣品仍可達到很高的靈敏度。LC/MS/MS系統(tǒng)對生物樣品的提取、純化和濃縮等前處理過程沒有嚴格要求，一般采用液液萃取法(LLE)或固相萃取法(SPE)，但這兩種方法的缺點是比較費時。在線萃取技術在省時和省力方面顯出相當大的*性?，F(xiàn)有幾種在線萃取技術，如在線固相萃取、柱切換、涂層毛細管微萃取(CCME，有時又稱固相微萃取(SPME)、多元LC系統(tǒng)等。在線萃取技術使得LC-MS／MS優(yōu)點更加明顯，它可以實現(xiàn)微量、高通量樣品分析。

　　Xia用兩根平行的樣品前處理柱OasisHLB(1×50mm，3μm)分別與一根分析柱相連接，利用柱切換技術在兩根平行的樣品處理柱之間交替進行凈化、富集。此方法的樣品量僅為10μL，凈化時間0.3min，整個樣品分析時間1.6min，而且方法精密度很好，日內(nèi)、日間誤差6.6％。Hempenius將96孔固相萃取裝置與LC/MS/MS系統(tǒng)相聯(lián)，血漿樣品直接注入孔內(nèi)的SPE柱中，凈化后的樣品再經(jīng)LC分離，MS／MS采用選擇反應檢測模式(SRM)，血漿樣品中的氟哌啶醇檢測限為0.1ng／mL，方法不準確度<10％，樣品分析時間約1.9min。Takeshi對血液或尿液中11個添加的吩噻嗪類藥物進行了分析，LC/MS/MS系統(tǒng)采用SPME法，樣品在毛細管內(nèi)壁涂層中經(jīng)過選擇性吸附與解吸，再經(jīng)LC分離，MS或MS／MS檢測。Wong開展了微透析LC/MS/MS系統(tǒng)生物活體分析，方法是將微透析探針直接插入鼠的頸靜脈中，松果體素腹膜內(nèi)注射后，透析液(連續(xù)15h，每隔0.5h)被自動注入到1.12-MS／MS儀中進行分析，實時了解松果體素在體內(nèi)的生化過程及代謝情況。另外，Wong采用相類似的方法，將微透析探針插入鼠腦紋狀體中，對神經(jīng)遞質乙酰膽堿進行微小環(huán)境的活體分析。手性藥物在制藥行業(yè)中有著特殊意義，高通量手性液相串聯(lián)質譜可及時了解對映體在體內(nèi)代謝過程，是手性藥物研究有力工具。LC/MS/MS系統(tǒng)可以鑒別分析體液中各種類型的藥物，文獻已報道有：羅丁諾森、茚地那韋、疊氮胸苷、齊多夫定、安替比林、奧美拉唑、恩丹西酮、孕三烯酮、右美沙芬、氟尼縮松、特樂福本、抗炎松、特比奈芬、新伐他丁、利多卡因、苯海拉明、雷帕霉素、利布樂定、福辛普利、普萘洛爾、普羅帕酮等。

　　天然產(chǎn)物(中藥材)成分復雜，對這些產(chǎn)物的分析，以及對其中活性成分鑒定確實困難。而LC/MS/MS系統(tǒng)可對天然產(chǎn)物進行成分鑒定和測定，如生曬參中人參皂甙、蒺藜中甾體皂甙、紫杉中紫杉醇、盾葉鬼臼根莖中木酚素和綠茶中兒茶素等。3．2興奮劑，毒品檢測

　　1980年奧林匹克委員會把阿片、可卡因、麥角酰二乙胺(LSD)、苯丙胺、大麻、苯二氮卓和促蛋白合成類固醇列為禁用藥物，這些藥物在體內(nèi)主要以代謝產(chǎn)物形式存在。例如，阿片類含有酚羥基或醇基等，很容易與人體內(nèi)的葡糖醛酸結合；合成類固醇在體內(nèi)以睪酮形式代謝。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)可實現(xiàn)蛋白質的快速高靈敏度鑒別和測定，蛋白質酶解后，產(chǎn)生多個肽段，經(jīng)過LC分離，用MS／MS可獲得肽的質量譜，因此可對肽段進行鑒別和測定；通過蛋白質序列數(shù)據(jù)檢索，可得出蛋白質序列信息。利用LC/MS/MS系統(tǒng)還可以開展DNA-藥物結合態(tài)分析，肽及蛋白質與金屬離子配位研究等。