國標解讀丨動物毛發(fā)MALDI-TOF定性定量檢測方法
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GB/T 42699.2-2023《紡織品 某些動物毛纖維蛋白質(zhì)組定性和定量分析 第2部分:還原蛋白質(zhì)多肽分析基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)法》,在2023-08-06正式發(fā)布,將在2024-03-01正式實施。該國家標準由 TC209(全國紡織品標準化技術(shù)委員會)歸口,TC209SC1(全國紡織品標準化技術(shù)委員會基礎(chǔ)標準分會)執(zhí)行 ,主管部門為中國紡織工業(yè)聯(lián)合會。
標準概要
n 該標準修改采用ISO國際標準:ISO 20418-2:2018。國際標準是基于島津MALDI-TOF系統(tǒng)上開發(fā),并在日本發(fā)行。
n 國內(nèi)標準與國際標準的差異其中之一是將國際標準采用的帶反射模式(島津AXIMA Performance),更改為反射模式或線性模式。適用MALDI-TOF機型擴展為線性模式的臺式機MALDI-TOF同時適用標準。
n 該標準目的是確立采用MALDI-TOF法測定紡織品中動物毛纖維混合物組分的定性定量方法。
動物毛纖維蛋白質(zhì)組定性和定量分析MALDI-TOF法原理
使用十二烷基磺酸鈉(SDS)/二硫蘇糖醇(DTT)/磷酸鹽緩沖液,提取動物毛發(fā)中的蛋白質(zhì)。提取的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)純化,再經(jīng)胰蛋白酶對凝膠中的蛋白質(zhì)進行酶解。使用MALDI-TOF-MS對物種特異的蛋白質(zhì)比例進行分析。對照標準曲線計算出混合物中各動物毛纖維的含量。
物種特異峰值出現(xiàn)的分子量范圍為2450 m/z~2750 m/z,各種動物毛纖維特種峰值在標準中已列出:
動物毛發(fā)鑒別分析技術(shù)在各個領(lǐng)域都起著重要作用。獸毛被用于制作外套、上衣、毛衣等各種纖維制品。制作這樣的纖維制品時,有義務(wù)根據(jù)家庭用品品質(zhì)標識法對纖維的種類、使用多種纖維時的混用率進行標識。另外,毛發(fā)混入食品中時,確定毛發(fā)種類對明確混入途徑至關(guān)重要。
經(jīng)過胰蛋白酶處理的多肽采用MALDI-TOF MS分析。用MALDI-TOF MS檢測金屬靶板上的結(jié)晶樣品。調(diào)整激光功率等的檢測條件,確保在觀察動物種類特異性峰值的m/z2450-2750領(lǐng)域能得到良好的分辨率。通過對SDS-PAGE蛋白條帶進行胰蛋白酶解后的樣品,進行MALDI-TOF MS檢測。
通過MALDI-TOF MS技術(shù)找到山羊絨、羊毛、牦牛毛三者之間的差異峰值區(qū)間m/z 2450-2750和特異峰值。如圖所示。
MALDI-TOF MS 中的動物物種類特異性峰值
島津應(yīng)對方案和機型
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