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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2025-05-09 17:14:13瀏覽次數(shù)：1740
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
品系選擇：
常用品系：BALB/c nu/nu裸鼠（T細(xì)胞缺陷）、NOD-SCID（T/B/NK細(xì)胞缺陷）、NSG（NOD-SCID-IL2Rγ-/-，全免疫缺陷）。
性別與周齡：優(yōu)先選擇雄性裸鼠（6-8周齡，體重18-20 g），減少激素干擾。
飼養(yǎng)條件：SPF級(jí)環(huán)境，溫度22-25℃，濕度40-70%，12小時(shí)光照/黑暗周期。
細(xì)胞株選擇：
高成瘤細(xì)胞：HCT-116（結(jié)直腸癌，成瘤率100%）、SKOV3（卵巢癌）、SGC-7901（胃癌）。
爭(zhēng)議性細(xì)胞：如Hep-G2（肝癌）需高細(xì)胞密度（1×10? cells/只）接種。
細(xì)胞預(yù)處理：
傳代要求：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞（活力>95%），胰酶消化后離心（1000 rpm，5分鐘），重懸于PBS或基質(zhì)膠（Matrigel）中（體積比1:1）。
濃度調(diào)整：常規(guī)接種濃度1×10?~1×10? cells/mL（具體依細(xì)胞株特性調(diào)整）。
注射部位：
腋下：右腋皮下（淋巴引流明確，便于觀察轉(zhuǎn)移）。
背部：中線兩側(cè)（避免動(dòng)物抓撓）。
操作步驟：
麻醉：1%戊ba比妥鈉（50 mg/kg）或異氟烷吸入麻醉。
注射：使用1 mL注射器（22-25G針頭），緩慢注入0.1-0.2 mL細(xì)胞懸液（避免滲漏）。
退針后輕壓注射點(diǎn)，防止細(xì)胞液反流。
成瘤時(shí)間：
快速成瘤型：HCT-116（7天可見(jiàn)結(jié)節(jié)）。
慢速成瘤型：原代細(xì)胞或低侵襲性細(xì)胞需2-4周。
監(jiān)測(cè)指標(biāo)：
腫瘤體積：游標(biāo)卡尺測(cè)量長(zhǎng)徑（L）和短徑（W），按公式V=1/2×L×W2計(jì)算。
動(dòng)物狀態(tài)：體重變化、活動(dòng)度、腫瘤潰瘍情況。
成功標(biāo)準(zhǔn)：瘤體體積≥100 mm3（通常接種后2-4周）。
生長(zhǎng)曲線分析：繪制腫瘤體積-時(shí)間曲線，計(jì)算倍增時(shí)間（如HCT-116約3天）。
HE染色：觀察腫瘤細(xì)胞異型性、核分裂象及間質(zhì)浸潤(rùn)。
免疫組化：檢測(cè)Ki-67（增殖指數(shù)）、CD31（微血管密度）等標(biāo)志物。
基因表達(dá)：qPCR或Western blot驗(yàn)證目標(biāo)基因（如PRDX4、ASAP1）在瘤體中的表達(dá)。
信號(hào)通路分析：檢測(cè)PI3K/AKT、VEGF等通路關(guān)鍵蛋白。
小動(dòng)物PET/CT：18F-FDG示蹤腫瘤代謝活性。
活體熒光成像：適用于標(biāo)記熒光素酶（Luc）的腫瘤細(xì)胞。
細(xì)胞預(yù)處理：
基質(zhì)膠混合：增強(qiáng)細(xì)胞黏附與血管生成（如SKOV3聯(lián)合Matrigel）。
低溫操作：細(xì)胞懸液全程冰上保存，減少凋亡。
動(dòng)物選擇優(yōu)化：
年輕裸鼠：4-6周齡代謝活躍，成瘤更快。
免疫強(qiáng)化品系：NSG小鼠適用于低成瘤性細(xì)胞。
| 問(wèn)題類(lèi)型 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 無(wú)腫瘤形成 | 細(xì)胞活力低/接種量不足 | 提高細(xì)胞濃度至1×10? cells/mL，檢測(cè)臺(tái)盼藍(lán)染色 |
| 腫瘤體積差異大 | 注射不均勻或滲漏 | 使用細(xì)針頭（25G），退針后按壓30秒 |
| 動(dòng)物死亡 | 麻醉過(guò)量或感染 | 控制戊ba比妥鈉劑量≤50 mg/kg，術(shù)后給予抗生素 |
原位移植模型：
皮下傳代后切取瘤塊（1 mm3）移植至靶器官（如胃壁），模擬轉(zhuǎn)移。
基因編輯模型：
CRISPR/Cas9敲除目標(biāo)基因（如KMT2D）后接種，研究基因功能。
案例：卡培他濱抑制HCT-116裸鼠瘤體生長(zhǎng)，腫瘤體積減少60%。
評(píng)價(jià)指標(biāo)：瘤重抑制率=（對(duì)照組瘤重-實(shí)驗(yàn)組瘤重）/對(duì)照組瘤重×100%。
案例：sh-PRDX4組瘤體體積較對(duì)照組下降50%，證實(shí)PRDX4促癌作用。
驗(yàn)證方法：shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染+皮下成瘤。
案例：過(guò)表達(dá)miR-449a抑制Bel-7402肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，肺轉(zhuǎn)移灶減少80%。
技術(shù)延伸：結(jié)合淋巴結(jié)解剖與HE染色分析轉(zhuǎn)移率。
3R原則：
替代（Replacement） ：優(yōu)先使用體外模型預(yù)實(shí)驗(yàn)。
減少（Reduction） ：每組≥5只裸鼠（統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。
優(yōu)化（Refinement） ：術(shù)中麻醉+術(shù)后鎮(zhèn)痛（布洛芬5 mg/kg）。
數(shù)據(jù)記錄：詳細(xì)記錄接種時(shí)間、細(xì)胞批次、動(dòng)物編號(hào)。
病理存檔：瘤體福爾馬林固定或液氮凍存，供后續(xù)分析。
裸鼠皮下成瘤模型因其操作簡(jiǎn)便、成本可控和高重復(fù)性，成為腫瘤研究的核心工具。未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)包括：
多組學(xué)整合：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序解析瘤內(nèi)異質(zhì)性。
動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)技術(shù)：納米探針聯(lián)合micro-CT實(shí)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移灶無(wú)創(chuàng)檢測(cè)。
人源化升級(jí)：PDX（人源腫瘤異種移植）模型替代傳統(tǒng)CDX模型，提高臨床預(yù)測(cè)性。
