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色氨酸檢測方法

閱讀:5077        發(fā)布時間:2014-10-23

色氨酸檢測方法

 

一、標準溶液的配置

  準確稱取色氨酸標準樣品0.0204g,用0.1mol/L氫氧化鈉水溶解并定容至50mL,則色氨酸濃度為2μmol/mL,即20.42mg/100mL

二、5mol/L的氫氧化鈉的配置方法:

  準確稱取200g氫氧化鈉,用水溶解并定容至1L。

二、前處理方法

1、水解:準確稱量0.3-0.5g樣品于水解管中,加入5mol/L氫氧化鈉10mL,放置30分鐘以上后再封口,放入145℃烘箱中4小時,取出放涼后,直接用漏斗轉入50mL容量瓶中,用6mol/L鹽酸中和到中性,用水定容,取適量過0.45μm的濾膜用于衍生。

2、衍生:a、準確吸取10ul過濾好的樣液注入小試管中。

         b、將小試管放入真空瓶中,在真空泵上抽濾20分鐘,抽濾好后用鑷子取出小試管,看小試管中還有沒有未抽干的樣液。

         c、往抽干的小試管中注入20ul衍生緩沖液放在混勻器上混勻2分鐘,混勻好后再在小試管中注入20ul衍生試劑,再放在混勻器上混勻2分鐘。

         d、用封口膠將混勻好的小試管封口。(封口時要注意不能有漏的地方)。

         e、將封好口的小試管放入60℃的烘箱里烘30分鐘。

         f、將烘好的小試管上的封口膠取掉,用移液槍準確移取160ul的平衡緩沖液注入小試管中,在混勻器上混勻2分鐘就可以進樣了。

注意事項:

1、 樣品加完氫氧化鈉后,要放置30分鐘以上再封口,防止在烘箱中進行水解反應時爆炸。

2、 從水解管中轉入容量瓶時,直接轉移,不用濾紙過濾,因為堿對濾紙有腐蝕性。

3、 注意檢查小試管有沒有抽干時一定不要倒置,防止有為抽干的樣液損失。

4、 封口時一定要封嚴。

 

除氨基酸分析方法包外海需要如下:

 

需要準備的試劑:

色氨酸標準品,氫氧化鈉,鹽酸

 

需要準備的耗材:

0.45μm的濾膜,50mL容量瓶,移液器槍頭200ul,封口膜,

 

需要的儀器:

天平,烘箱,移液器200ul

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