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丙二醛(MDA)含量檢測(cè)試劑盒

  MDA 提取： 1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。 

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測(cè)定步驟： 1、吸取 0.6mL 試劑一于 1.5mL 離心管中，再加入 0.2mL 樣本, 混勻。 2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心 10min。 3、吸取上清液于 1mL 玻璃比色皿中，測(cè)定 532nm 和 600nm 處的吸光度，記為 A532 和 A600， ΔA= A532-A600。

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MDA 含量計(jì)算： 1、血清（漿）中 MDA 含量的計(jì)算： MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷V 樣=25.8×ΔA 2、細(xì)菌、細(xì)胞或動(dòng)物組織中 MDA 含量計(jì)算（1）按照蛋白濃度計(jì)算 MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(Cpr×V 樣)=25.8× ΔA ÷Cpr 需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。（2）按照樣品質(zhì)量計(jì)算 MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=25.8×ΔA ÷W (3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： MDA 含量(nmol/104 )=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.0516×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積， 8×10-4 L；ε：丙二醛摩爾消光系數(shù)，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.2 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。