樣本采集:依據檢測需求,采集適量人靜脈血。將血液室溫靜置,待其自然凝固后,通過離心分離獲取血清樣本;若需血漿樣本,則在采血時加入合適抗凝劑,再經離心處理得到。采集過程需嚴格遵循無菌操作規(guī)范,防止樣本污染。采集后的樣本若不能及時檢測,應妥善保存于 - 20℃冰箱,避免反復凍融影響抗體活性。
試劑盒準備:從冰箱取出試劑盒,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,使試劑盒內各試劑溫度均勻。同時準備好移液器、吸頭、酶標儀等實驗器材,并檢查其性能是否正常,確保檢測工作順利開展。
加樣:將標準品(若有)、待測樣本及空白對照按規(guī)定體積準確加入微孔板相應孔中,輕輕振蕩混勻,促使樣本與包被抗原充分接觸,然后在設定溫度下孵育一定時間,以保證抗原抗體反應充分進行。
洗板:孵育結束后,棄去孔內液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結合的物質,有效降低非特異性信號干擾。每次洗滌后需將微孔板拍干,防止殘留液體影響后續(xù)反應結果。
加酶標抗體:向各孔加入適量酶標抗人 IgM 抗體,振蕩混勻后再次孵育,使酶標抗體與已結合的軍團菌 IgM 抗體充分結合。
顯色與終止:加入底物顯色液,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時,加入終止液終止反應,使反應停止在最佳檢測狀態(tài),便于準確讀取結果。
結果判定:立即使用酶標儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽性,表明樣本中存在軍團菌 IgM 抗體;若樣本 OD 值小于等于臨界值,則判定為陰性,即樣本中未檢測到軍團菌 IgM 抗體。對于具有定量功能的試劑盒,可根據標準曲線計算出樣本中軍團菌 IgM 抗體的具體含量。
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的軍團菌 IgM 抗體,有助于在感染早期,抗體水平較低時及時發(fā)現(xiàn)感染,為早期診斷提供有力支持。
特異性強:試劑盒中的抗原和酶標抗體對軍團菌 IgM 抗體具有高度特異性,與其他病原體抗體交叉反應極小,保證檢測結果的準確性,有效減少誤診和漏診情況。
操作簡便:整個檢測流程相對標準化,操作步驟清晰明了,經過簡單培訓的人員即可熟練操作,適用于各級醫(yī)療機構和實驗室。
結果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,試劑盒內各試劑性能穩(wěn)定,多次檢測同一批樣本,結果重復性良好,為臨床診斷和病情監(jiān)測提供可靠的數(shù)據支持。
臨床診斷:用于軍團菌肺炎等軍團菌感染疾病的早期診斷,幫助醫(yī)生快速判斷病因,制定合理的治療方案,提高患者治yu率。
疫情監(jiān)測:在軍團菌疫情可能爆發(fā)的區(qū)域,對人群進行大規(guī)模篩查,及時發(fā)現(xiàn)潛在感染源,有效控制疫情傳播,為公共衛(wèi)生防控提供重要依據。
流行病學調查:通過檢測人群中軍團菌 IgM 抗體的陽性率,了解軍團菌在特定地區(qū)的感染流行情況,為制定針對性的防控措施提供數(shù)據支撐。