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固相萃取儀如何操作呢？

閱讀：2361 發(fā)布時(shí)間：2022-7-5

固相萃取儀的使用：
1.活化

固相萃取儀萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤，因?yàn)樘盍细稍飼档蜆悠繁Ａ糁担餍≈母稍锍潭炔灰?，也會影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機(jī)溶劑沖洗填料，因?yàn)榧状寄軡櫇裎絼┍砻?，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤濕；然后再加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率。

2.上樣

①用0.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)，使pH=9，離心取上層液萃??；

②用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃??；

③用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH值后萃??；

④超聲15min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min，流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。

3.淋洗

反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個(gè)小柱的容積，而SPE濾膜為5-10ml。

4.洗脫

應(yīng)選用5-10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物，再用極性較強(qiáng)的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。

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