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糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍染色試劑盒產品說明書 

主要用途

糖蛋白電泳高碘酸希爾法阿爾新藍染色試劑是一種旨在通過阿爾新藍和高碘酸希爾方法的結合，所產生的藍色和紫紅色，來識別蛋白電泳中不同糖蛋白的而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。主要適用于各種蛋白電泳分析中糖蛋白成分檢測。產品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術背景

阿爾新藍（alcian blue）染料是一種水溶性的銅酞菁基團（cuprophthalocyanine group）的堿性染料。由于分子中銅的存在，而呈現(xiàn)藍色。在低pH的環(huán)境下，阿爾新藍與多價陰離子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多價陰離子反應，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基團形成鹽鍵（salt linkage），呈現(xiàn)（通常高碘酸希爾法陰性）藍色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明中性粘多糖蛋白陽性。在糖蛋白電泳上，使用高碘酸希爾法阿爾新藍染色技術，可以檢測到25至100納克的糖蛋白。

產品內容

固定液（Reagent A）  250毫升

染色液A（Reagent B）   50毫升

氧化液（Reagent C）   50毫升

染色液B（Reagent D）   50毫升

還原液（Reagent E）   50毫升

保存液（Reagent F）   50毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液A（Reagent B）和染色液B（Reagent D），嚴格密封瓶口，避免光照； 試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

100毫升燒杯：用于配制工作液的容器

塑料盤：用于染色的容器

無離子水：用于稀釋試劑溶液

平式搖蕩儀：用于染色操作時的孵育

實驗步驟

實驗開始前，完成SDS-PAGE蛋白電泳的運行，取出6cm X 8cm 的膠體，作好定向標記，然后進行下列操作：

• 準備6個100毫升的燒杯，作好1至6號標記
• 移取50毫升固著液（Reagent A）到1號燒杯，加入50毫升用戶自備的無離子水，充分混勻
• 加入到8cm X 10cm 大小的染色盤
• 將聚丙烯酰胺凝膠放進染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50RPM（注意：如果用戶需要暫停，可以過夜，但注意液體揮發(fā)）
• 小心倒掉染色盤里的固著液（Reagent A）
• 加入100毫升用戶自備的無離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無離子水
• 重復實驗步驟7至9一次
• 移取10毫升染色液A（Reagent B）到2號燒杯，加入90毫升無離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升2號燒杯里稀釋的染色液A（Reagent B）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至呈現(xiàn)藍色條帶為止，嚴格避免光照
• 小心倒掉染色盤里的染色液A（Reagent B）
• 加入100毫升用戶自備的無離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無離子水
• 重復實驗步驟15至17二次
• 移取10毫升氧化液（Reagent C）到3號燒杯，加入90毫升無離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升3號燒杯里稀釋的氧化液（Reagent C）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的氧化液（Reagent C）
• 加入100毫升用戶自備的無離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無離子水
• 重復實驗步驟23至25二次
• 移取10毫升染色液B（Reagent D）到4號燒杯，加入90毫升無離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升4號燒杯里稀釋的染色液B（Reagent D）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至呈現(xiàn)品紅色條帶為止，嚴格避免光照
• 小心倒掉染色盤里的染色液B（Reagent D）
• 移取10毫升還原液（Reagent E）到5號燒杯，加入90毫升無離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升5號燒杯里稀釋的還原液（Reagent E）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育60分鐘，速度為50RPM，或直至背景清晰
• 小心倒掉染色盤里的還原液（Reagent E）
• 加入100毫升用戶自備的無離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育10分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無離子水
• 重復實驗步驟35至37一次（注意：條帶更加清晰）
• 移取10毫升保存液（Reagent F）到6號燒杯，加入90毫升無離子水，充分混勻
• 加入上述配制的100毫升6號燒杯里稀釋的保存液（Reagent F）到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50RPM，或過夜至次日處理
• 直至完成所有拍照和分析：呈現(xiàn)藍色或紫紅色為糖蛋白陽性條帶

注意事項

• 本產品為5次（50至75個樣本）操作
• 操作時，須戴手套
• 所有操作在室溫下和通風柜里進行
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議蛋白上樣量為30至100微克
• 染色液B（Reagent D）出現(xiàn)沉淀，可以溫熱、攪拌或過濾后使用
• 染色液B（Reagent D）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 確保膠體浸泡在試劑液體里
• 染色時，嚴格避免光照
• 染色避免過度，肉眼可見深藍色或深紅色即可終止染色
• 染色通常20分鐘即可顯色，如果樣本濃度過低，可以增加染色時間至2小時
• 膠體如果達到1.5毫米厚，可以增加所有試劑處理時間一倍
• 本產品可以用于西方雜交的蛋白印跡膜的糖蛋白染色
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定顯色清晰