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Candor公司|LowCross-Buffer/低交叉反應(yīng)緩沖液說(shuō)明書(shū)

Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應(yīng)緩沖液說(shuō)明書(shū)

LowCross-Buffer

低交叉反應(yīng)緩沖液

HAMA-阻斷劑替代品

提高結(jié)果的可靠性

LowCross-Buffer^?能夠大限度的減少以下因素的干擾：

l 人抗鼠抗體（HAMA）

l 類風(fēng)濕因子（RF）

l 基質(zhì)效應(yīng)

干擾通常是由人抗鼠抗體（HAMA），類風(fēng)濕因子（RF）以及高含量的膽紅素，甘油三酯等引起的。這些干擾不可能*由HAMA阻斷劑處理。HAMA阻斷劑只對(duì)HAMA有效果,相比之下，LowCross-Buffer^?作為一種實(shí)驗(yàn)緩沖液，它能夠有效地阻止包括由HAMA引起的大量干擾因素的影響，所以LowCross-Buffer^?可以作為HAMA阻斷劑的替代品。LowCross-Buffer^?有助于消除免疫分析中微弱或中等的親和交叉反應(yīng)所帶來(lái)的干擾，就像一個(gè)"親和門衛(wèi)"。范圍內(nèi)的診斷和制藥公司利用LowCross-Buffer^?，成功地將各種干擾因素的影響降至低，成為有經(jīng)濟(jì)效益的解決方法。LowCross-Buffer^?被廣泛地應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），免疫印跡（Western Blotting），蛋白質(zhì)芯片，免疫組織化學(xué)以及側(cè)向?qū)游龅葯z測(cè)，此外，它在基于熒光磁珠的實(shí)驗(yàn)和SPR（表面等離子諧振）實(shí)驗(yàn)中也有應(yīng)用。

對(duì)HAMA和類風(fēng)濕因子有效：

在CE認(rèn)證的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（HAMA-ELISA，medac，德國(guó)）中，LowCross-Buffer^?抗HAMA和類風(fēng)濕因子干擾的效果已經(jīng)被證實(shí)。實(shí)驗(yàn)使用商業(yè)化的人源HAMA和RF陽(yáng)性樣本 (in. vent diagnostic, Germany)進(jìn)行。使用LowCross-Buffer和未用LowCross-Buffer得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應(yīng)緩沖液說(shuō)明書(shū)

即用型

LowCross-Buffer^?可用來(lái)替代標(biāo)準(zhǔn)的稀釋緩沖液或者抗體稀釋緩沖液。

防腐劑：含有0.1%的ProClin^? 300。

產(chǎn)品規(guī)格： 50ml   產(chǎn)品編號(hào)100 050

           125ml   產(chǎn)品編號(hào)100 125

           500ml   產(chǎn)品編號(hào)100 500

 LowCross-Buffer^?也有適用于生產(chǎn)試劑盒廠商的大包裝。

圖1：LowCross-Buffer^?可以將HAMA和RF陽(yáng)性樣本的干擾降至實(shí)驗(yàn)的背景水平范圍內(nèi) (<40ng/ml，根據(jù)HAMA-ELISA說(shuō)明書(shū)）。

圖2：蛋白芯片分析中表面與檢測(cè)抗體的非特異性結(jié)合減少。使用LowCross-Buffer后使信噪比從3，4提高到17，3。（data from N. Dankbar, university of Münster)

圖3：兔血清中CRP 的ELISA實(shí)驗(yàn)：LowCross-Buffer通過(guò)去除基質(zhì)效應(yīng)來(lái)提高實(shí)驗(yàn)的靈敏度（carried out by A. Zellmer, CANDOR Bioscience).

ELISA實(shí)驗(yàn)中，用兔血清作為底物，加入一定濃度的CRP（C反應(yīng)蛋白）做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別用PBS/BSA標(biāo)準(zhǔn)緩沖液和LowCross-Buffer稀釋兔血清。包被到ELISA板上，然后加入酶標(biāo)二抗顯色。CRP的一個(gè)特性就是可以與許多蛋白結(jié)合。LowCross-Buffer可以降低CRP與兔血清的結(jié)合，提高酶標(biāo)二抗與兔血清的結(jié)合效率，從而提高檢測(cè)結(jié)果的靈敏性。

圖4：Western blotting 檢測(cè)細(xì)胞角蛋白4,5,6（done by Dr. D. Sperling, MACHEREY-NAGEL, Düren).

這個(gè)圖比較了用LowCross-Buffer? 和 TTBS (Tween/Tris-buffered salt solution)檢測(cè)的差別。LowCross-Buffer? 可以*阻止非特異性結(jié)合。角質(zhì)蛋白4,5,6 分子量在56 -60 kDa 之間。使用LowCross-Buffer?后可以很明顯得被檢測(cè)到。處理膜后，泳道1和1‘的檢測(cè)來(lái)源為肝細(xì)胞，泳道2和2‘為HeLa細(xì)胞。M為蛋白分子量標(biāo)記，用品紅染色。印跡膜為硝酸纖維素膜。泳道1和2可以清晰的在56 -60 kDa 之間看到特異性條帶。在泳道1‘和2‘條帶很雜，背景值很高，條帶不特異，有雜蛋白的干擾。

圖5：LowCross-Buffer在抗豚鼠IgG的ELISA實(shí)驗(yàn)中可以預(yù)防假陽(yáng)性的集合降低假陽(yáng)性的干擾。

(done by Dr. C. Specht, PARA Bioscience, Gronau).分別用PBS和LowCross-Buffer稀釋抗體，結(jié)果如圖所示。1-6和7-12是做的兩組平行實(shí)驗(yàn)。

A1-12是特異性對(duì)照組：與樣本相似的抗原包被在孔板中，然后加入特異性一抗，酶標(biāo)二抗。

H1-12是空白對(duì)照組：稀釋液代替樣本，然后加入特異性一抗和酶標(biāo)二抗。

圖6：使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液PBS/BSA/Tween和LowCross-Buffer (Candor Bioscience GmbH, Weissensberg,Germany)的ELISA結(jié)果對(duì)比.

Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應(yīng)緩沖液說(shuō)明書(shū)

用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)一種實(shí)驗(yàn)性治療蛋白藥物，這個(gè)蛋白藥物溶于人血清中，在這兩種實(shí)驗(yàn)緩沖液中的稀釋比例為1:750。FDA規(guī)定的藥物安全性實(shí)驗(yàn)的變異率不能超過(guò)15%。

圖7：LowCross-Buffer對(duì)HAMA活性影響的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

使用medac GmbH的HAMA-ELISA試劑盒  (Wedel, Germany)進(jìn)行HAMA活性測(cè)試。LowCross-Buffer使所有血清樣本中的HAMA活性顯著降低至40 ng/ml的界限值以下。

圖8：使用HAMA-ELISA試劑盒中的實(shí)驗(yàn)緩沖液（MEDAC，Vir-Dil）和不同類型的LowCross-Buffer測(cè)試類風(fēng)濕血清的交叉結(jié)合反應(yīng)性。交叉反應(yīng)可能會(huì)導(dǎo)致免疫診斷中不正確的結(jié)果。LowCross-Buffer的所有類型都可通過(guò)交叉反應(yīng)的親和力的不同來(lái)阻止類風(fēng)濕因子和實(shí)驗(yàn)抗體的不需要的結(jié)合，實(shí)驗(yàn)抗體和分析物的結(jié)合親和力較高。

圖9：側(cè)向?qū)游鰧?shí)驗(yàn)中，血清稀釋緩沖液LowCross-Buffer? STRONG(CANDOR Bioscience GmbH, Wei?ensberg)增加了抗新蝶呤抗體對(duì)血清中新蝶呤的敏感性。這個(gè)是實(shí)驗(yàn)檢測(cè)病人血液中抗新蝶呤抗體的靈敏性高低的。這個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性的側(cè)向?qū)游鰧?shí)驗(yàn)試劑盒來(lái)自8sens.biognostic GmbH, Berlin。減少示蹤抗體的量對(duì)提高競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)的敏感性是非常重要的。

 Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應(yīng)緩沖液使用說(shuō)明：

可用于ELISA、EIA、RIA、 Western blotting、免疫-PCR、蛋白芯片、多分析物免疫測(cè)定和免疫組化分析實(shí)驗(yàn)，具體應(yīng)用取決于檢測(cè)類型和使用的抗體性質(zhì)。

LowCross-Buffer^?可以替代免疫反應(yīng)中的標(biāo)準(zhǔn)樣品緩沖液或抗體稀釋緩沖液。

 1.ELISA: 樣本和檢測(cè)抗體的稀釋緩沖液。

 2. Western blotting: 一抗和二抗的稀釋緩沖液。

 3. 免疫組化分析: 一抗和二抗的稀釋緩沖液。

4. 蛋白芯片: 樣本和檢測(cè)抗體的稀釋緩沖液。

ELISA和蛋白芯片中樣本或者標(biāo)準(zhǔn)品可用LowCross-Buffer^?按1:2稀釋或者更高的稀釋比例。

LowCross-Buffer^?還可以用來(lái)作為洗滌緩沖液– 尤其是競(jìng)爭(zhēng)性或者高靈敏性實(shí)驗(yàn)，如免疫PCR。使用之前請(qǐng)立即混勻。

 注意事項(xiàng)：

標(biāo)準(zhǔn)品和樣本要嚴(yán)格按照相同的方式處理。

抗體用LowCross-Buffer^?稀釋時(shí)，需要按照抗體說(shuō)明書(shū)推薦的濃度進(jìn)行，一抗和二抗也是如此。

LowCross-Buffer^?不適用于作電泳緩沖液。

LowCross-Buffer^?不適用于作表面封閉液。表面封閉液推薦使用The Blocking Solution (訂購(gòu)編號(hào)110 050，110 125，110 500)。

在某些情況下檢測(cè)信號(hào)會(huì)變?nèi)酢owCross-Buffer^?可以減少親和力低或者中等親和性的結(jié)合。如果使用親和性低或者中等親和性的檢測(cè)抗體或者多克隆抗體，檢測(cè)信號(hào)就會(huì)減弱，因?yàn)槎嗫寺】贵w通常含有低或者中等親和性的結(jié)合成份。在這種情況下適當(dāng)地增加多克隆抗體的濃度可以增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)。

雖然LowCross-Buffer?可用作實(shí)驗(yàn)緩沖液，但是ELISA微孔表面以及Western Blotting的膜表面還是需要用封閉液進(jìn)行封閉。我們推薦使用The Blocking Solution (訂購(gòu)編號(hào)：110 050，110 125，110 500)。

免疫實(shí)驗(yàn)的組份，包括LowCross-Buffer^?的成份可能會(huì)終止某些熒光染料的熒光。我們推薦使用Oyster*- (Denovo Biolabels), CyDye**-(Amersham)或者Alexa***- (分子探針) 作為熒光染料。

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