欧美……一区二区三区,欧美日韩亚洲另类视频,亚洲国产欧美日韩中字,日本一区二区三区dvd视频在线

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 細(xì)胞技術(shù)專題:四唑鹽(MTT)比色實驗
中級會員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機(jī):
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

細(xì)胞技術(shù)專題:四唑鹽(MTT)比色實驗

2014-3-12  閱讀(1310)

分享:

標(biāo)簽: 四唑鹽 MTT 比色

MTT法建立于20世紀(jì)80年代初,是一種通過測定細(xì)胞能量代謝水平用以間接反映細(xì)胞增殖情況的檢測方法。它基于兩個假設(shè):1、只有活細(xì)胞能夠?qū)TT還原成為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物,而死細(xì)胞不能達(dá)到;2、其吸光度與活細(xì)胞數(shù)量成直線正相關(guān)。

實驗方法

  • MTT法
實驗方法原理活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490 nm 波長處測定其光吸收值,可間接反映細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
實驗材料

細(xì)胞

試劑、試劑盒

D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶

儀器、耗材

凈化工作臺 離心機(jī) 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 玻璃瓶 培養(yǎng)瓶 廢液缸 吸頭 槍頭 膠塞 離心管 量加樣槍 紅血球計數(shù)板

實驗步驟

一、接種細(xì)胞

1.  用0.08%胰蛋白酶消化單層培養(yǎng)細(xì)胞。

2.  用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成單個細(xì)胞懸液。

3.  以每孔103~104個細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中,每孔體積200 ul。


二、培養(yǎng)細(xì)胞

1.  將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中。

2.  在37℃、5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)。(培養(yǎng)時間取決于實驗?zāi)康暮鸵螅?/a>


三、呈色

1.  每孔加入MTT溶液(5 mg/ml)20 ul,37℃孵箱中繼續(xù)孵育4 h。

2.  終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。

3.  對于懸浮生長的細(xì)胞,需離心(1000 rpm,5 min),然后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

4.  每孔加入150 ul DMSO,振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。


四、比色

1.  選擇490 nm 波長,在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果。

2.  以時間為橫軸,光吸收值為終軸繪制細(xì)胞生長曲線。

收起 
注意事項

1.  選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。在進(jìn)行MTT試驗前,對每一種細(xì)胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線,然后確定試驗中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間。


2.  避免血清干擾,一般選小于10%胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗。


3.  設(shè)空白對照,與試驗平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照孔。zui后比色時,以空白孔調(diào)零。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
產(chǎn)品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

對比框

在線留言