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很多膜可作為蛋白質電轉移的固相支持物，如重氮化纖維素膜（DPT，DBM）、DEAE-纖維素膜、尼龍膜等，但用的zui多的還是硝酸纖維素膜（NC膜），該膜與蛋白質以非共價的疏水作用形式結合，結合能力約為80 μg/cm2。
實驗方法
- 基本方案
| 實驗材料 | 蛋白質 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 轉移緩沖液 甲醇 電極緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 電轉移槽 電泳儀 |
| 實驗步驟 | 1. 剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜。 2. 將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉移緩沖液中浸泡3-5分鐘。 3. 按下列過程安裝轉移裝置，將塑料支架平放在含轉移緩沖液的托盤中，在塑料支架上放一塊海綿。 4. 將3塊3MM濾紙對齊放在海綿上，然后依次將NC膜、凝膠、及另3塊慮紙和海綿放上。 5. 用塑料支架夾緊上述各層，放入電轉移槽內(nèi)，NC膜一側向正極，凝膠一面向負極。 6. 接通電源電壓120 mA，轉移6小時以上或夜。 7. 轉移結束后，取出塑料支架，依次取掉各層，用鉛筆在膜的上沿作好標記，切下其中一個孔所對應膜的一半，用氨基黑或考馬士亮蘭染色，檢查轉移效果。 8. 將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上，室溫干燥30~60分鐘（可不做）。 |
| 注意事項 | 1. 慮紙及膜的大小不應大于待轉移膠的大小，否則在轉移過程中會發(fā)生短路，影響轉移效果。 2. 操作中應戴手套，切不可用手直接觸摸，因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉移。 3. 放置NC膜和濾紙時，每層之間不應有氣泡，否則將影響轉移效果。 4. 待轉移蛋白分子量決定轉移時間，分子量大，轉移時間長，反之則小。 5. 干燥雖然可使蛋白質更牢固地結合到膜上，但也可能加劇蛋白 |
