ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測(cè)量生物分子相互作用（如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等）的熱力學(xué)參數(shù)的精密儀器。
以下是ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1. 加載樣品
滴定池（Sample Cell）：
加入受體溶液（如蛋白質(zhì)或核酸溶液）。
注射器（Syringe）：
吸入配體溶液（如底物或抑制劑），確保無(wú)氣泡，安裝到注射器模塊。
2. 開(kāi)始滴定
基線穩(wěn)定：
啟動(dòng)儀器，等待基線穩(wěn)定。
初始滴定：
執(zhí)行一次大體積滴定，觀察信號(hào)響應(yīng)，檢查是否漏液或堵塞。
正式滴定：
按設(shè)定參數(shù)逐滴滴定，記錄每次滴定后的熱量變化。
觀察信號(hào)峰值和回歸基線情況，避免過(guò)載或飽和。
3. 數(shù)據(jù)采集
實(shí)時(shí)監(jiān)控：
觀察軟件中的原始滴定曲線，確保信號(hào)正常（如峰形對(duì)稱(chēng)、無(wú)異常噪聲）。
保存數(shù)據(jù)：
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后保存原始數(shù)據(jù)文件，備份至本地或云端。
二、ITC等溫滴定量熱儀實(shí)驗(yàn)后處理：
1. 清洗儀器
沖洗注射器和滴定池：
用超純水或緩沖液多次沖洗，去除殘留樣品。
拆卸注射器，用專(zhuān)用工具清洗活塞和密封圈，避免堵塞。
干燥與維護(hù)：
擦干儀器表面，定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
2. 數(shù)據(jù)分析
擬合模型：
使用分析軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。
選擇合適模型（如單一站點(diǎn)結(jié)合模型、多站點(diǎn)模型或異構(gòu)結(jié)合模型）。
參數(shù)提?。?/div>
結(jié)合常數(shù)（Ka）：反映配體與受體的結(jié)合親和力。
焓變（ΔH）：結(jié)合過(guò)程的熱量變化（正值為放熱，負(fù)值為吸熱）。
熵變（ΔS）和吉布斯自由能（ΔG）：通過(guò)范特霍夫方程計(jì)算。
化學(xué)計(jì)量數(shù)（n）：配體與受體的結(jié)合比例。
3. 結(jié)果驗(yàn)證
重復(fù)實(shí)驗(yàn)：
重復(fù)至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，確保數(shù)據(jù)一致性。
對(duì)照實(shí)驗(yàn)：
設(shè)置空白對(duì)照（如緩沖液滴定緩沖液），排除非特異性信號(hào)。
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