linktech CPR II說(shuō)明書

化學(xué)磷酸化是酶法（使用T4多核苷酸激酶和ATP）的成本有效的替代方法，允許有效引入末端磷酸基團(tuán)。含有5'-磷酸基團(tuán)的寡核苷酸具有多種應(yīng)用，通常廣泛地用作將一種寡聚物連接到另一種寡核苷酸（例如作為連接子和銜接子）的方法，用于克隆，基因構(gòu)建和連接。這仍然是常見(jiàn)的基因合成方法。然而，3'-磷酸化用于阻斷酶活性。例如，這是一種有效且常用的PCR阻斷技術(shù)。

使用磷酸鹽-ON（2101）（也稱為化學(xué)磷酸化試劑（CPR））常規(guī)地實(shí)現(xiàn)寡核苷酸上5'末端的磷酸化，其產(chǎn)率高于使用激酶。除了其固有的便利性之外，CPR還具有優(yōu)于酶促方法的優(yōu)勢(shì)，以允許由于DMTr保護(hù)基的存在而確定磷酸化效率。但是，三苯甲基不能用作純化手柄。在氫氧化銨脫保護(hù)過(guò)程中，它與磺?；一黄鸨幌援a(chǎn)生5'-磷酸。2101也可以在3'末端使用，通過(guò)添加到任何支持物（例如dT柱）中摻入3'-磷酸。這對(duì)于標(biāo)記較高孔的長(zhǎng)寡核苷酸特別有用
沒(méi)有用于改性的膠料樹(shù)脂。正是出于這個(gè)原因，我們推出了3000Å??磷酸鹽載體。該技術(shù)不于磷酸鹽改性，因?yàn)槿魏胃男詠喠柞０范伎梢约尤氲搅姿猁}-ON-T中。在這種情況下，寡核苷酸將在3'末端用“修飾劑 - 磷酸酯-3'”終止。

另一種磷酸化試劑，稱為CPR II（2110），已由芬蘭圖爾庫(kù)大學(xué)的研究人員描述。使用該產(chǎn)物，常規(guī)的氫氧化銨裂解產(chǎn)生用DMTr-醚在5'-磷酸保護(hù)的寡核苷酸。在該階段，通過(guò)例如RP-HPLC或柱純化，可以容易地將寡核苷酸與截短的雜質(zhì)分離。然后通過(guò)含水酸除去DMTr-基團(tuán)并進(jìn)行簡(jiǎn)單的氫氧化銨處理，得到5'-磷酸酯?；蛘?，后偶聯(lián)的產(chǎn)率可以通過(guò)寡核苷酸的脫三苯甲基化來(lái)量化，同時(shí)仍然在載體上。然后去保護(hù)導(dǎo)致5'-磷酸化的寡核苷酸。該CPR II試劑已經(jīng)進(jìn)一步精制（通過(guò)用乙酯代替甲基酰胺）來(lái)提供產(chǎn)物，solidCPR ^TM（2127，也稱為CPR IIa），具有CPR II的所有優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)也是一種穩(wěn)定的固體，可以輕松稱量，處理和溶解（2101和2110都是粘性玻璃）。該產(chǎn)品還允許選擇DMT ON純化。盡管2101可用于3'-磷酸化，但3'-磷酸SynBase ^TM CPG 1000/110和3000/110（2279和2398）允許直接制備具有3'-磷酸基團(tuán)的寡核苷酸。2127或2110不能用于3'-磷酸化，因?yàn)镈MTr保護(hù)的OH需要釋放磷酸基團(tuán)。

2127中甲基酰胺的存在保護(hù)了β-消除反應(yīng)的修飾，直到脫保護(hù)過(guò)程中的堿水解。因此，這可以與Fmoc或乙酰丙?；Ｗo(hù)的支化單體（例如2150）結(jié)合使用，直到脫保護(hù)步驟直至形成磷酸酯部分。2101不受β-消除保護(hù)，并且在分支點(diǎn)的去保護(hù)期間將形成磷酸酯部分。因此，如果在3'末端使用它，它將從支持物上切割寡核苷酸（如2279/2389那樣）。

Chemical Phosphorylation

CPR II

3- [2-（4,4'-二甲氧基三苯甲基氧基）-2,2'-二羧基乙基 - 丙基 - （2-氰基乙基） - （N，N-二異丙基） - 亞磷酰胺

• 產(chǎn)品編號(hào)： 2110
• 分子式： C ₃₉ H ₅₁ N ₂ O ₉ P.
• 配方重量： 722.82
• 單重： 79.98