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了解實(shí)時熒光定量PCR儀的系統(tǒng)組成

閱讀:1779      發(fā)布時間:2020-6-8
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    普通的基因擴(kuò)增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。 但是,某些需要定量的實(shí)驗(yàn)就必須用到實(shí)時熒光定量PCR儀了。實(shí)時熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng),主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的。

    實(shí)時熒光定量PCR儀主要由兩部分組成,一個是PCR系統(tǒng),一個是熒光檢測系統(tǒng)。由于定量PCR必需借助樣本和標(biāo)準(zhǔn)品之間的對比來實(shí)現(xiàn)定量的,對于定量PCR系統(tǒng)來說,重要的參數(shù)除了傳統(tǒng)PCR的溫控精確性、升降溫速度等等,更重要的還在于樣品孔之間的均一性,以避免微小的差別被指數(shù)級放大。至于熒光檢測系統(tǒng),多色多通道檢測是當(dāng)今的主流趨勢,儀器的激發(fā)通道越多,儀器適用的熒光素種類越多,儀器適用范圍就越寬;多通道指可同時檢測一個樣品中的多種熒光,儀器就可以同時檢測單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標(biāo)+樣品,通道越多,儀器適用范圍越寬、性能就更強(qiáng)大。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源,前者可配多色濾光鏡實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長,而單色發(fā)光二極管LED價格低、能耗少、壽命長,不過因?yàn)槭菃紊?,需要不同的LED才能更好地實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管,前者可以一次對多點(diǎn)成像,后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品,需要通過逐個掃描實(shí)現(xiàn)多樣品檢測,對于大量樣品來說需要較長的時間。定量PCR儀需要考慮的另外一個因素是軟件設(shè)計,這一點(diǎn)目前較新型號的儀器都有不錯的配套軟件可以滿足常規(guī)使用。

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