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細胞實驗驗證基因功能
閱讀：1056 發(fā)布時間：2023-6-21
一、實驗材料： 疾病對應的細胞系（或者是原代細胞），預算充足情況下可以選擇2種細胞系，暫定為：A和B細胞
二、實驗方案：敲低兩種細胞的目的基因1、過表達兩種細胞的目的基因1（若是miRNA可以使用mimics、inhibitor）
三、干擾片段篩選：2種細胞都需要篩選（當用mimics和inhibitor時也需要初步篩選表達效果）
目的基因1干擾片段篩選：針對目的基因1設計并合成3條siRNA及NC，轉染細胞，QPCR篩選出干擾 的片段進行后續(xù)實驗；
四、實驗分組：A或B細胞
A
A+siRNA NC對照組
A+siRNA目的基因1干擾
A+過表達目標基因1
A+過表達空載
抑制劑處理濃度1
五、檢測項目：
細胞增殖或者細胞毒性檢測（CCK法/MMT），
流式檢測細胞周期，
流式檢測細胞凋亡，
細胞侵襲實驗（transwell），遷移、劃痕
WB檢測細胞信號通路中蛋白的表達變化，
QPCR檢測信號通路中基因的表達，
免疫熒光檢測下游信號通路蛋白
流式多色檢測某些marker指標
Coip檢測A和B蛋白是否結合
雙熒光素酶檢測A和B是否結合
油紅O染色
生化檢測：SOD，CAT等
透射電鏡