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奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)調(diào)整方法
奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)調(diào)整方法
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為了使奧林巴斯顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明,在奧林巴斯顯微鏡初次安裝和調(diào)試時(shí),就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好,這是正確使用奧林巴斯顯微鏡,并獲得正確結(jié)果的重要手段和較為基本的要求。
奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下4項(xiàng)內(nèi)容:
(1) 照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整
?、?首先將燈室的外殼打開,壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中,安裝時(shí)避免手指直接接觸燈泡(可用柔軟的布或紙隔住),以免燈泡上留有指紋等臟物,影響燈泡的使用壽命。
?、?把燈室擺在桌面上,接通電源后,用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔(標(biāo)有"←→"),使燈絲投影在1-2m外的墻上,將燈絲成像調(diào)至清晰;然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔(標(biāo)有"──"),使燈絲位置高低適當(dāng);再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔(標(biāo)有"──"),使燈絲左右位置合適。
(2) 光源發(fā)光體(燈絲)在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的檢驗(yàn)和校正:
目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi),從光源的角度去確保奧林巴斯顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明,這是調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的前提條件。需要的基本工具:對(duì)中望遠(yuǎn)鏡購(gòu)置奧林巴斯顯微鏡時(shí)已配備。
?、?拔掉燈庫(kù)內(nèi)的毛玻璃套筒,把燈室裝回奧林巴斯顯微鏡上;
?、?選用10×物鏡,開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰,再換用40×物鏡把樣品調(diào)焦清 晰(40×物鏡可以看清燈絲的全貌);
?、?把聚光鏡的孔徑光闌和視場(chǎng)光闌均開到較為大;
?、?拔掉其中一個(gè)目鏡,換上對(duì)中望遠(yuǎn)鏡,抓住白色部分,另一手伸縮黑色接目鏡,就可在視野中看到燈絲像;
?、?如燈絲位置不合適,調(diào)"──"孔,把燈絲像沿水平方向調(diào)好,調(diào)"──"孔,把絲像沿垂直方向調(diào)好,直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像;
?、?調(diào)整完畢后,將毛玻璃套筒插回原位,拔掉對(duì)中望遠(yuǎn)鏡,換回目鏡作下一步調(diào)整。以上所述照明光源燈室在奧林巴斯顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的校驗(yàn),只需在奧林巴斯顯微鏡初次安裝調(diào)試及更換燈泡時(shí)進(jìn)行,平時(shí)使用奧林巴斯顯微鏡時(shí)不能隨意亂調(diào)亂動(dòng)。萬(wàn)一調(diào)亂時(shí),可按上述步驟調(diào)回原狀。
(3) 庫(kù)勒照明(Kohler)系統(tǒng)的正確調(diào)整:
奧林巴斯顯微鏡的正確調(diào)試,主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調(diào)整,而其中的關(guān)鍵是庫(kù)勒照明系統(tǒng)的調(diào)整。對(duì)于每一位使用奧林巴斯顯微鏡的人員,特別是作顯微照像的人員來(lái)說(shuō),應(yīng)該對(duì)庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理及其調(diào)整步驟有一定的了解和掌握,才能充分發(fā)揮奧林巴斯顯微鏡應(yīng)有的功能,拍出來(lái)的照片才能在效果上比較一致而又完善。庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是:光源發(fā)光體上任意一點(diǎn)發(fā)出的光,可以照明奧林巴斯顯微鏡的視域范圍,而光源發(fā)光體上每一點(diǎn)所發(fā)出的光匯集起來(lái),在奧林巴斯顯微鏡的視域中就實(shí)現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的目的,是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明,防止雜散光對(duì)照像系統(tǒng)造成影響或干擾,以免照像時(shí)在底片形成灰霧。高調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的必要部件:視場(chǎng)光闌、可進(jìn)行合軸調(diào)整的聚光鏡系統(tǒng)。
?、?選用10×物鏡和10×目鏡;
② 把聚光鏡前端透鏡擺進(jìn)光路中,孔徑光闌調(diào)至適中的位置上(不大不小),再把聚光鏡升到較為頂?shù)奈恢蒙?,聚光鏡轉(zhuǎn)盤調(diào)至明視野"J"位置;
?、?把視場(chǎng)光闌調(diào)至較為小(0。1);
?、?載物臺(tái)上放上已封片的生物樣品,開亮光源,調(diào)焦清晰;
?、?視域中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)局部照明的區(qū)域或亮斑,這是視場(chǎng)光闌的模糊像,在其中可以清晰地看到樣品的細(xì)節(jié);在它之外是較暗的視域,不一定能把樣品的細(xì)節(jié)看得清楚;
?、?把聚光鏡微微地向下調(diào),使視野中的亮斑逐漸收小,慢慢變成一個(gè)清晰的多邊形象,這便是視場(chǎng)光闌的清晰像;
⑦ 一般情況下,多邊形象并不在視域中央,需要調(diào)整聚光鏡的一對(duì)調(diào)中螺絲,把視場(chǎng)光闌多邊形的像調(diào)至中央位置;
?、?逐漸開大視場(chǎng)光闌,使多邊形象成為視域的內(nèi)接多邊形,進(jìn)一步核對(duì)調(diào)中的狀況,如對(duì)中不夠理想,繼續(xù)微微調(diào)對(duì)中螺絲;
⑨ 將視場(chǎng)光闌稍為再微微開大一些,使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上,至此,庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整完畢。
(4) 孔徑光闌的正確使用:
由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響奧林巴斯顯微鏡的分辨率,使用時(shí)應(yīng)掌握正確的使用方法。過(guò)去由于對(duì)孔徑光闌的認(rèn)識(shí)不足,往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度,但會(huì)直接影響成像的反差、對(duì)比度及分辨率,在使用過(guò)程中應(yīng)盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用,以便在觀察時(shí),尤其在作顯微照相時(shí)獲得較為佳分辨率,在每換用一個(gè)倍數(shù)的物鏡時(shí),在樣品調(diào)焦清晰后,需要調(diào)節(jié)孔徑光闌,使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑(物鏡孔徑像)的2/3 。調(diào)整方法是用對(duì)中望遠(yuǎn)鏡對(duì)焦于視野中黑色相差環(huán)上,調(diào)節(jié)孔徑光闌,可以看到一個(gè)多邊形的孔徑光闌像,然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的2/3,即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之間。為方便起見,可把與各倍數(shù)物鏡相對(duì)應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好,并作好標(biāo)記,以免每次使用都要重新調(diào)整。
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