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恒遠產(chǎn)品文獻:TGF-β,VEGF,EGF試劑盒引用文獻

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復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響
竇群立1,袁韓濤2,黃雅松2,申海濱2
(1.陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院,陜西 咸陽 712000;2.陜西中醫(yī)藥大學,陜西 咸陽 712000)

【摘要】目的 探討復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響。方法 選取SPF級成熟年齡SD大鼠75只,隨機分成五組,各15只:生理鹽水組、復方苦參黃柏溶液組、氧療組、復方苦參黃柏溶液+氧療組、康復新液組。適應性喂養(yǎng)1周后進行造模,并于造模成功之后的第2天開始給藥,在造模后的第3天、第7天、第10天、第14天觀察創(chuàng)面組織學的改變。在第3天、第7天、第14天對創(chuàng)面進行標本采集,用ELISA檢測標本中EGF、VEGF、TGF-β的含量。結(jié)果 創(chuàng)面組織學生長情況:在檢測的同一時期,復方苦參黃柏溶液+氧療組成纖維細胞數(shù)量,新生毛細血管,膠原纖維等生長明顯強于其余四組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。生理鹽水組差,其余三組介于三者之間且差異不大。標本中EGF、VEGF、TGF-β含量檢測情況:在檢測的同一時段,復方苦參黃柏溶液+氧療組EGF、VEGF、TGF-β含量明顯高于其余四組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),生理鹽水組EGF、VEGF、TGF-β含量低,其余三組EGF、VEGF、TGF-β含量介于三者之間且差異不大。結(jié)論 復方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復模型大鼠的創(chuàng)面修復有促進作用、亦可提高組織中EGF、VEGF、TGF-β的含量,且三者對創(chuàng)面的修復可能具有相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】復方苦參黃柏溶液;氧驅(qū)動霧化;創(chuàng)傷修復;EGF;VEGF;TGF-β

【中圖分類號】R856.2

【文獻標識碼】B

【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.12.192.03
當前經(jīng)濟化的高速的發(fā)展,創(chuàng)傷的發(fā)病情況成為心臟病、腦血管病、腫瘤疾病之后,導致人類傷殘甚至死亡第四個原因[1]。本實驗從傳統(tǒng)中藥聯(lián)合局部氧療治療創(chuàng)傷修復的思路出發(fā),結(jié)合傳統(tǒng)中藥與氧療的方法,創(chuàng)新氧驅(qū)動中藥霧化局部外治的新型治療方法,實驗研究復方苦參黃柏溶液氧驅(qū)動霧化外治對創(chuàng)傷修復模型大鼠的治療作用,并對其作用機理進行初步探討,以期為治療創(chuàng)傷皮膚修復提供新方法,并為新治療方法提供實驗依據(jù)?,F(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。
1 材料與方法
1.1 動物
清潔級SD大鼠75只,雄性,體重大約在200~250 g,由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供(動物合格證號:SCXK(軍)2012-0007),在實驗動物中心適應性飼養(yǎng)1周。
1.2 藥物與試劑
復方苦參黃柏溶液的組成有:苦參30 g、黃柏20 g、蒼術(shù)15 g、艾葉10 g、重樓25 g、花椒12 g。由陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房提供,飲片經(jīng)提純加工成每10 mL相當于原藥材3.5 g的溶液,由陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑中心提制備??祻托乱河伤拇ê冕t(yī)生攀西藥業(yè)有限責任公司提供。TGF-β、VEGF、EGF試劑盒由上海恒遠生物科技有限公司提供。
1.3 主要儀器
離心機,KDC-40(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);酶標儀,RT-6000(深圳雷杜生命科學股份有限公司);自動組織包埋機,STD-30(德國萊卡公司);組織切片機,KHF-524(德國萊卡公司)等。
1.4 方法
1.4.1 造模
造模前大鼠背部脫毛、稱重,腹腔注射10%戊巴bi妥鈉3.5 ml/kg麻醉后,消毒鋪巾,在脊旁0.5 cm兩側(cè),各作一個1.6*1.6 cm2矩形標記,切除全層皮膚,止血后用無菌紗布包扎,常規(guī)飼養(yǎng)。
1.4.2 分組及換藥
造模完成后,利用隨機法分組。造模成功后第2天,按文獻方法折算大鼠用藥量 [2]。模型組:15只,每天用生理鹽水濕敷創(chuàng)面20 min。中藥組:15只,每天用復方苦參黃柏溶液濕敷創(chuàng)面20 min。氧療組:15只,每天局部氧療20分鐘。
4.康復新液組:15只,每天用康復新液濕敷創(chuàng)面20 min。中藥氧療組:15只,每天用氧驅(qū)復方苦參黃柏溶液霧化創(chuàng)面20 min。霧化步驟:10 ml復方苦參黃柏溶液加入儲藥罐內(nèi),通過連接霧化嘴、霧化器儲藥罐、吸入管與氧氣導管作為霧化管道,調(diào)節(jié)氧氣裝置直至儲藥罐有霧化液氣出現(xiàn),用霧化液氣對創(chuàng)面進行治療。換藥每天1次,共14天,各組治療完成后用無菌敷料包扎創(chuàng)面。
1.4.3 取材
對創(chuàng)面干預后第3、7、14天。每組5只大鼠,消毒,鋪巾,切除全層皮膚不傷及皮下脂肪及深筋膜,采取標本后頸椎脫臼處死實驗動物。標本一部分稱取重量,加入一定量的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),備用。使用時,用勻漿器將標本和PBS的混合物研磨充分。用離心機在轉(zhuǎn)速為2000~3000轉(zhuǎn)/分下保持20 min后移液槍收集上清液等待檢測各項指標。標本融化后仍然保持2~8℃的溫度,使用EGF、VEGF和TGF-β試劑盒進行細胞因子水平檢測;另一部分放在10%福爾馬林溶液中固定24 h,然后脫鈣48 h備用,后期做石蠟切片。

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