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恒遠產(chǎn)品文獻:ＲT-PCＲ試劑盒在文獻中的應(yīng)用
閱讀：834 發(fā)布時間：2019-11-22蘿卜硫素對腎小管上皮細胞氧化應(yīng)激及 Nrf2 /HO -1信號通路的影響
覃正碧1 毛衛(wèi)林2 ( 湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院 1． 藥學(xué)部; 2． 泌尿外科 湖北恩施 445000)
摘 要 目的: 探討蘿卜硫素( SFN) 對腎小管上皮細胞( HK-2) 的氧化應(yīng)激及核轉(zhuǎn)錄因子 E2 相關(guān)因子 2( Nrf2) /血紅素加氧酶( HO) -1 信號通路的影響。方法: 體外培養(yǎng) HK-2 細胞，將細胞分為空白對照組、H2O2處理組、H2O2 + 10 μmol·L － 1 SFN 組、H2O2 + 20 μmol·L － 1 SFN 組和 H2 O2 + 40 μmol·L － 1 SFN 組; 測定 HK-2 細胞中丙二醛( MDA) 、一氧化氮( NO) 、谷胱甘肽( GSH) 的含量及超氧化物歧化酶( SOD) 的活性; ＲT-PCＲ 和 Western Blot 法分別檢測 Nrf2 和 HO-1 mＲNA 及蛋白表達水平。結(jié)果: 與空白對照組相比，H2O2處理組中 MDA、NO 含量明顯升高，GSH 水平和 SOD 酶活性顯著降低( P ＜ 0． 05) ; 經(jīng)高、中、低 3種濃度的蘿卜硫素處理后 MDA、NO 含量顯著降低，GSH 水平顯著升高，SOD 酶活性也顯著升高，Nrf2 和 HO-1mＲNA 及蛋白表達明顯上調(diào)( P ＜ 0． 05) 。結(jié)論: 蘿卜硫素有抗 HK-2 細胞氧化應(yīng)激損傷的作用，其作用機制可能與激活 Nrf2 /HO-1 信號通路有關(guān)。
關(guān)鍵詞 蘿卜硫素; 腎小管上皮細胞; 氧化應(yīng)激; 核轉(zhuǎn)錄因子 E2 相關(guān)因子 2; 血紅素加氧酶
蘿卜硫素( sulforaphane，SFN) 又名萊菔硫素，是從蔬菜中發(fā)現(xiàn)的植物活性物質(zhì)，具有良好的抗癌效果，在西藍花、芥藍等十字花科植物中的含量非常豐富，并且是一種多功能的酶誘導(dǎo)物，可誘導(dǎo)Ⅱ型解毒酶的產(chǎn)生而起到抗癌的作用［1 ～ 4］。大量實驗結(jié)果表明蘿卜硫素可以在體外抑制多種腫瘤細胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，但其作用機制目前尚不清楚。在多種病變細胞中均存在氧化應(yīng)激損傷，而氧化應(yīng)激是指機體或細胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生失衡，或外源性氧化物質(zhì)攝入過多，導(dǎo)致活性氧在細胞內(nèi)累積所致的毒性反應(yīng)。研究還表明氧化應(yīng)激過程是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一個重要促進因素。核因子相關(guān)因子 2( Nrf2) 屬于堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族成員，在抗炎應(yīng)答元件( AＲE) 介導(dǎo)的抗炎癥抗氧化基因表達中起重要作用［5］。Nrf2 可進入核內(nèi)，與 AＲE 結(jié)合，并參與下游Ⅱ相代謝酶基因的轉(zhuǎn)錄，其中就包括血紅素加氧酶( HO-1) 。Nrf2-AＲE 通路具有細胞保護的作用，并能通過產(chǎn)生 HO-1 發(fā)揮抗
炎抗腫瘤的作用。HO-1 屬于熱休克蛋白家族，具有明顯的抗炎抗氧化作用，是血紅素代謝的限速酶［6］。本研究將外源性活性氧過氧化氫( H2O2 ) 作用于腎小管上皮細胞( HK-2) ，探討蘿卜硫素對 HK-2 細胞氧化應(yīng)激及 Nrf2 /HO-1 信號通路的影響。
1 材料及方法
1． 1 材料
HK-2 細胞株購置于上?？茖W(xué)生物研究所( 從美國 ATCC 細胞庫引進) ，蘿卜硫素( 上海原葉生物有限公司，CAS No． 121-42-3，含量≥99% ) ; ＲPMI1640 培養(yǎng)基( Thermo Scientific 公司，中國北京) ; 胎牛血清( Gibco 公司，批號 20160954) ; 胰蛋白酶( 上海谷歌生物有限公司，批號 C2385) ; 丙二醛( MDA)含量測定試劑盒 、一氧化氮( NO) 含量測定試劑盒、超氧化物歧化酶( SOD) 活性測定試劑盒、谷胱甘肽( GSH) 含量測定試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司。CCK8 試劑盒( 上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司，批號 B1549) ; ＲIPA 裂解液( 上海吉諾公司，批號C1478) ; SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒( 上海谷歌生物有限公司，批號 147566) ; BCA 試劑盒( 上海谷歌生物有限公司，批號 P0012S-54) ; BSA 粉末( 武漢谷歌生物有限公司，批號 20160815) ; ＲT-PCＲ 試劑盒( 上海恒遠生物科技有限公司，批號 P0023D-57) ; β-actin、Nrf2、HO-1 一抗均購自美國 Sigma 公司; 二抗羊抗兔 IgG 購自美國 Sigma 公司。
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