化工儀器網(wǎng)
技術文章
恒遠為您總結ELISA實驗失敗的原因
閱讀：1330 發(fā)布時間：2021-2-3ELISA試劑盒實驗也同樣如此，成功的實驗是一個循序漸進的過程，影響ELISA實驗結果的因素有很多，只有一一的掌握了實驗的細節(jié)，才能購做出完美的實驗。您可知您的ELISA試劑盒實驗為什么會失??？今天文章的內(nèi)容中，小編將為您找找其中的原因。
第yi、標本的影響
溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺可溶性的有色物質，即顯藍色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。
第二、標本受細菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
第三、標本保存不當
在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5d內(nèi)測定的血清標本可存放于4
℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
第四、標本凝固不全
在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。