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流式細胞儀的調(diào)試和校準是怎么進行的
流式細胞儀的調(diào)試和校準是怎么進行的
光譜流式細胞術(shù)是一種基于常規(guī)流式細胞術(shù)的技術(shù)，其中光譜儀和多通道檢測器代替了常規(guī)系統(tǒng)中的傳統(tǒng)反射鏡，濾光器和光電倍增管。流式細胞儀可以快速進行多參數(shù)收集并分析單個細胞或顆粒上的數(shù)據(jù)。
流式細胞儀可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量，并可以根據(jù)預選的參量范圍把細胞亞群從中分選出來。儀器采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率;利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標記技術(shù)，保證檢測的靈敏度和特異性;用計算機系統(tǒng)對流動的單細胞懸液中單個細胞的多個參數(shù)信號進行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測速度與統(tǒng)計分析精確性。
流式細胞儀的調(diào)試和校準是怎么進行的：
在使用前，甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試，以保證工作的可靠性和佳性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為大。
液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
測量區(qū)光路調(diào)節(jié):這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
流式細胞術(shù)中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定，這樣才能通過相對測量獲得的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度。標準樣品應該穩(wěn)定，有形成份形狀應是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟、容易獲得。