NADH氧化酶(NOX)活性檢測試劑盒 輔酶系列

產(chǎn)品名稱：NADH氧化酶(NOX)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名： NADH Oxidase(NOX) Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0630              產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣    產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：560
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NADH氧化酶試劑盒|活性檢測試劑盒| NOX活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為無色的DCPIP，在600nm下測定藍(lán)色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價：	選擇規(guī)格
BC0630-50管/24樣	Solarbio	50管/24樣	560.00元

產(chǎn)品內(nèi)容
試劑一：液體 25mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 0.5mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑四：液體 70mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑六：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 9mL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

產(chǎn)品說明
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將 NADH 氧化為 NAD。該酶不僅參與 NAD 的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。 NOX 能夠?qū)?NADH 氧化為 NAD，NADH 的氧化與 2,6 二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)， 藍(lán)色的 DCPIP 被還原為無色的 DCPIP，在 600nm 下測定藍(lán)色 DCPIP 的還原速率計算出 NADH 氧化 酶活性的大小。
自備儀器和試劑  可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

操作步驟
一、樣品測定的準(zhǔn)備：
1、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
2、 準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽 勻漿。
3、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。
4、 將上清液移另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
5、 將上清液轉(zhuǎn)移另一 EP 管中，用于線粒體中泄露 NOX 活性測定。
6、 沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，用于 NOX 活性測定。
7、 NOX 總酶活即為上清中 NOX 活性與沉淀中 NOX 活性之和。
二、測定步驟和加樣表：
1、可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上；
2、試劑四 37℃保溫放置。

將上述試劑按順序在 1mL 玻璃比色皿中操作，加入試劑六后立即混勻，同時開始計時，在 600nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1，迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入 37℃水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng) 1 分鐘。迅速取出比色皿并擦干，記錄 1 分 20 秒時的吸光度 A2。計算 ΔA=A1-A2，記錄 A 測定、A 對照，ΔA1=ΔA 上清測定-ΔA 上清對照，ΔA2=ΔA 沉淀測定-ΔA 沉淀對照。
三、NOX 活力單位的計算： 
A、上清中 NOX 活力的計算: 
1、組織中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清

1. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。
NOX（U/g 鮮重）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=2525×ΔA1÷W
 2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清

1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。
NOX（U/104 cell）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=5.05×ΔA1 V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣本：加入樣本體積，0.04mL；V 提?。杭尤胩崛∫后w積，1.01mL； Cpr 上清：上清中蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

B、沉淀中 NOX 活力的計算:
1、組織中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀

1. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。
NOX（U/g 鮮重）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=505×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。
NOX（U/104 cell）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=1.01×ΔA2 V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣本：加入樣本體積，0.04mL；V 樣總：沉淀重懸體積，0.202mL； Cpr 沉淀：沉淀重懸后蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

C、樣本 NOX 總活力的計算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=2525×ΔA1÷W +505×ΔA2÷W
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀 （2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/104 cell）=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2

注意事項
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度保持 37℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水，將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、實驗時，試劑六樣本在冰上放置，以免變性和失活。

相關(guān)文獻(xiàn)：
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《Antioxidant and antihyperlipidemic activities of purified polysaccharides from Ulva pertusa》 作者:Weida Li,Kai Wang,Nanfang Jiang,Xiaolei Liu,Minghui Wan, Xintao Chang, Dongmei Liu, Huimin Qi,Shunmei Liu 期刊:Journal of Applied Phycology 影響因子:4.784 PMID:29476858
《Sensory plasticity of carotid body is correlated with oxidative stress in paraventricular nucleus during chronic intermittent hypoxia》 作者:Pei Liu  Hong‐Mei Zhang  Ke Hu  Xiu‐Fang Zhou  Si Tang 期刊:J Cell Physio 影響因子:4.522 PMID:30609027
 

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