目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4575-100T/48Sα-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC4575 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | α-淀*酶活性檢測 |
α-淀*酶（α-AL）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4575
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體10mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入6.25 mL試劑三，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解，用不完的試劑2-8℃保存8周；
2、 標準品：10 mg淀粉標準品。臨用前加10 mL試劑三，置沸水浴中振蕩溶解，配成1 mg/mL淀粉標準液，2-8℃保存四周。
產(chǎn)品說明：
淀*酶負責(zé)水解淀粉，包括α-淀*酶和β-淀*酶。α-淀*酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
α-淀*酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合，生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物，其深淺可計算出淀*酶的活力單位。α-AL耐熱，但是β-淀*酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經(jīng)過70℃鈍化15min，就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
酶標儀/可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：稱取約0.1g樣本，加1mL蒸餾水勻漿；勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提??；6000g，室溫離心10min，吸取上清液即為淀*酶原液。
2、液體：直接檢測。（若有渾濁則離心后進行測定）
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到570nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2、 將淀粉標準液用蒸餾水稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標準溶液。
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
2 | 0.4 | 200 | 200 | 0.2 |
3 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
4 | 0.1 | 200 | 200 | 0.05 |
5 | 0.05 | 200 | 200 | 0.025 |
6 | 0.025 | 200 | 200 | 0.0125 |
7 | 0.0125 | 200 | 200 | 0.00625 |
實驗中每個標準管需100µL標準溶液。
3、 按操作表依次加入各試劑：
三、α-淀*酶活性計算
1、標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
2、α-淀*酶活性計算
（1）按照樣本質(zhì)量計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活力單位。
α-淀*酶活性 (U/g 質(zhì)量)=x×V樣÷(W×V樣÷V樣總)÷T=0.1×x÷W
（2）按照蛋白質(zhì)濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。
α-淀*酶活性 (U/mg prot)= x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1×x÷Cpr
（3）按照液體體積計算
單位定義：每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。
α-淀*酶活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T=0.1×x
V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：樣本總體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，10min。
注意事項：
吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8 時，可以對樣本進行適當(dāng)稀釋后測定。
實驗實例：
1. 取約0.1g藜葉片，加1mL蒸餾水勻漿，勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提?。?/span>6000g，室溫離心10min，吸取上清液，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A空白-（A測定-A對照）=1.065-（0.849-0.220）=0.436，帶入標準曲線y=2.628x-0.0051，計算x=0.168，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
α-淀*酶活性 (U/g 質(zhì)量)=0.1×x÷W=0.168 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC4580/BC4585 β-淀*酶（β-AL）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）
α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法 α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
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