生物通報道：流式細胞分析技術在現(xiàn)代細胞分子生物學研究中起著越來越重要的作用，這種分析技術是通過對單個細胞性狀的快速測定，并結合先進的計算機分析系統(tǒng)，使得在短時間內可對大量細胞進行定性、定量測定。但以往進行流式細胞儀操作和分析需要技術熟練的研究團隊，而且這一設備價值也不菲——起碼也要10萬美元，有些甚至達到50萬美元，這對于許多實驗室來說并不容易負擔。
近年來一些主流生物技術企業(yè)相繼推出了新型流式細胞儀，不單將原本需要一支工程師隊伍進行安裝的大型設備壓縮成為可以單人運送的緊湊型儀器，并讓這一原本需要專人專業(yè)培訓才能上手的復雜技術變得更加容易操作，而也價格也更加實惠——目前的流式細胞儀分析系統(tǒng)設置大部分都是自動化的， 相關試劑盒也經過了多次驗證，簡化了操作，降低了入門門檻。一些大型的公司，比如Sony和BD加大了研發(fā)力度，開發(fā)出了10萬美元以下的流式細胞儀，在美國其客戶群開始由中心實驗室轉向了個人實驗室。
雖然簡化了操作，但是這些新型的流式細胞儀也不是說就能立即上手的，用戶在購買之前要弄清楚這一技術到底能做什么，不能做什么，有時實驗室購買了流式細胞儀后覺得又不適用了，這樣即浪費資源，也耽誤時間，因此了解自己需要什么，了解不同儀器的優(yōu)缺點十分重要。以下是目前市面上較受關注的幾個新型流式細胞儀，通過分析它們的優(yōu)點和缺點，也許您在選購的時候就更有目的性了。
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代表著流式細胞儀重要創(chuàng)新、市場上*臺用聲波控制細胞移動的流式細胞計數系統(tǒng)，是一款由美國能源部國家實驗室（洛斯阿拉莫斯國家實驗室）研制的新型流式細胞分析儀，去年春天由ABI（Life Technologies）公司投入到了市場，不單榮獲了The Scientist雜志2010創(chuàng)新技術，也被生物通讀者投票入選2010年生物通生命科學創(chuàng)新產品。
流式細胞儀的原理在于讓細胞逐個穿過激光檢測設備，從而使科學家們得以對細胞進行計數和檢測。過去，研究人員必須在其靈敏分辨率和樣品進樣分析速度兩者之間二選一，取其平衡點。原因在于傳統(tǒng)的流式細胞儀由快速流動的鞘液流帶動樣品軸流經過激光檢測器。要加大樣品進樣分析速度就必須加大樣品軸流直徑，這意味著樣品流中細胞分散度擴大，細胞容易偏離激光檢測焦點——細胞偏離激光中心越遠則激發(fā)光強度變化越大，CV值越高——這就導致樣品分辨率下降——因此過去往往要為靈敏度而犧牲通量。
Attune聲波聚焦流式細胞儀通過一個看似簡單的原理——利用超聲波（超過2 MHz，類似于醫(yī)學成像中使用的超聲波）將細胞緊密聚集在激光檢測點的樣品軸流中軸線上，避免細胞隨軸流加寬而分散。這種聲波聚焦在很大程度上與樣品進樣流速無關，不論樣品流與鞘液流的比例如何，都可以使細胞緊密地聚集于激光檢測焦點，避免分散。即使是在高達1 mL/min的高樣品流速下，照樣可以維持的細胞排列——Attune流式細胞儀實現(xiàn)了在高進樣流速下的高檢測，能夠同時將速度和分辨率zui大化，并在檢測點開展cell-by-cell的細胞分析，解決了過去需要在靈敏度和速度之間折中的這個矛盾。所獲得的數據CV值低，峰更窄，峰分辨率高，分離更好，且數據更易闡釋。
Attune實現(xiàn)這一切并不需要采用可能傷害細胞的高速或大體積鞘流。由于不受物理鞘液流的限制，因而操作人員可以控制細胞通過激光光路的時間，這就意味著在分析微弱信號時，還可以減慢細胞的流速，延長細胞被照亮的時間，以便采集更多的光量子，從而獲得更清楚明確的結果以及更好地分離。高精度進樣泵還可完成細胞計數——進一步將費用和樣品制備時間降低。
Attune每次運行可收集高達2,000萬個細胞，流速可高達1000 μL/min，比其他細胞儀快10倍以上，且收集速率可在25-1,000 μL/min之間進行調整，4分鐘內分析多達4 mL樣品！
顯著提高的樣品收集速率和高樣品量對實驗意味著什么？用戶能更有效地分析相對稀釋的樣品，比如干細胞，腦脊液（CSF），或任何細胞數量低的稀有樣品，因為樣品中的顆粒能在檢測點聚集。難收集的樣品，如小鼠血液和骨髓、細針穿刺液或細胞少的樣品，都可以進行染色然后稀釋，而無需清洗或裂解RBC。在樣品制備過程中沒有發(fā)生樣品損失，所有珍貴樣品都能進行全盤檢測。另外全血樣品可以省去樣品制備，無需清洗和裂解紅細胞（RBCs），避免細胞損失和損傷，而不折損數據質量。
Attune聲波聚焦流式細胞儀是405nm紫色激光和488nm藍色雙激光設計，其中紫色激光要比其它一些經濟型流式細胞儀中用到的標準激光馬力更大，目前Life Technologies也針對這一儀器推出了優(yōu)化探針，更有利于研究人員實驗操作。
Attune聲波聚焦流式細胞儀可幫助科學家們實現(xiàn)對細胞群體中大量異質細胞進行統(tǒng)計學數據的采集，以便研究包括大小、復雜性、表型和健康情況在內的細胞群體參數。Attune的技術可讓科學家們獲得更高的靈敏度，通過增加通量來節(jié)約時間，并可用于體積小的樣品。
除此之外，Attune在提供這些升級性能的同時，還憑借緊湊的聲學技術而實現(xiàn)了體積小，以及開展實驗所需的消耗品量更少等優(yōu)勢。這些*的特征將有助于實現(xiàn)傳統(tǒng)細胞儀系統(tǒng)所無法實現(xiàn)的科研應用，從樣品分離制備到微珠為基礎的樣品分析。
去年舊版本的Attune并沒有安裝紅色激光——這是一些用戶比較喜歡的光源。而且在一些常用的流式細胞分析過程中，樣品都是高濃度，低體積的，如果用Attune，還要購買價格稍貴的tag，可能劃不來。不過生物通編輯剛剛得到的資料表明，版的Attune已經在原有的藍色/紫色激光基礎上新增加了藍色/紅色激光配置，這樣就可以根據個人的習慣選擇激光配置了。
如何面對突發(fā)疫情，Illumina即將推出MiSeq系統(tǒng)，歡迎索取相關技術資料>> >>
Accuri C6 Flow Cytometer歡迎索取相關技術資料>> >>
今年2月，BD公司（Becton, Dickinson and Company） 收購了美國密歇根州Ann Arbor市的Accuri Cytometer公司，這家公司是一家開發(fā)和生產科研型個人化流式細胞儀的儀器制造商。而C6 Flow Cytometer就是Accuri Cytometer公司的一款旗艦產品。
Accuri C6流式細胞儀相關產品有助于BD進入到新興的低成本個人化流式細胞儀市場，這也就是說C6流式細胞儀這款全功能、雙激光、六探測器的流式細胞儀分析系統(tǒng)具備操作簡單，成本底的特點。
首先C6流式細胞儀能避免操作新手的一個容易犯的錯誤——調整電壓，同步化不同的細胞。一般來說，只要關閉了電壓設施，那么就不可能再恢復數據了，除非你愿意重新來一次。而且在流量控制方面，C6流式細胞儀采用的是低壓流動系統(tǒng)（蠕動泵），而不是真空泵，因此可以控制樣本進樣速度和活性區(qū)流的直徑，這就能為樣本選擇*的活性流區(qū)的大小。
在性能方面，C6流式細胞儀的探測器不但可靈敏的捕獲前散射光和旁散射光，還有四個可調光學濾光片的熒光探測器。這一臺儀器可以實時收集1600萬個通道的數據，在分析過程中，C6流式細胞儀的動態(tài)范圍消除了對探測器進行補償的必要性，當使用Cflow軟件的Zoom function模式觀察一個特定通道時，其他數據仍然被監(jiān)測并且記錄到數據文件。
Cflow軟件是C6流式細胞儀的操作分析系統(tǒng)，這一操作系統(tǒng)能簡單快速的搜集分析數據加上高集成度、高度自動化的主機，以及優(yōu)良人機界面，研究人員經過半個小時的培訓，就可以靈活、準確的使用C6流式細胞儀系統(tǒng)。
除此之外，C6流式細胞儀安裝和維護也很簡單，這一系統(tǒng)擁有自動除污和清洗流路程序。當關閉主機時，自動化系統(tǒng)會自動用清洗液清洗流路系統(tǒng)，然后再使之充滿鞘液。鞘液會保持在流路系統(tǒng)中，直到下次開機。在使用過程中，如果需要啟動清洗流程，那么點擊一下鼠標就可以了。
而且現(xiàn)在，如果購買的機器出了問題不能解決，Accuri還會在維修機器期間，給用戶寄另外一臺機器來替換使用，避免耽誤實驗。
當然這臺機器也存在其缺點，首先C6流式細胞儀的軟件系統(tǒng)還在發(fā)展階段，缺乏一些功能，比如其軟件系統(tǒng)由于圖形不能擴展，因此無法得到高質量的圖像。要解決這個問題，可以采用第三方軟件，比如FlowJo進行編輯。
另外C6流式細胞儀設計小巧靈便，這是其優(yōu)點也是其缺點，因為容量問題也限制了它可容納的激光源和檢測器的數量。zui后這一儀器沖洗速度比同類型其它一些機器慢，因此如果樣品比較多，可能比較費時間。
Partec CyFlow Cube 6
德國Partec公司成立于1967年，是流式細胞儀的制造*，曾在1968年生產出了*臺商用流式細胞儀，憑借數十年的研制經驗和眾多流式分析的技術，Partec公司成為世界上的流式細胞儀制造商及供應商。
Partec公司生產的CyFlow系列流式細胞儀掌握了多項關鍵性技術，也是世界上*升上太空的流式細胞儀。其中Cube 6是CyFlow系列推出的新款流式細胞儀，這款高性能，低成本的流式細胞儀適用于實驗室常規(guī)研究分析，可用于醫(yī)療保健、微生物分析、工業(yè)農業(yè)應用等。
CyFlow Cube 6是一種超小型流式細胞儀，有兩種激光方式可選：Forward Scatter （FSC）, Side Scatter （SSC）（光源有多個選擇），并配有4色熒光通道（FL1-FL4）。由于其高性能的UV LED選項，CyFlow Cube 6能進行高分辨率DNA分析。
Partec公司的Cube系列產品還具有一個重要的特點，就是能隨著實驗室研究內容的變化，而擴充其應用范圍。一般實驗室隨著本身研究內容的發(fā)展，會出現(xiàn)不同的實驗分析需要，Cube系列產品包含有不同的模塊選擇，可以根據自身的需要選擇升級選項。
除此之外，CyFlow Cube 6相對而言也比較便宜——美國本地價格為3.5萬美元，一些小型實驗室或者預算有限制的實驗室可以考慮下這一產品。
Millipore Guava歡迎索取相關技術資料>> >>
密理博guava easyCyte系列產品（2009年密理博收購Guava Technologies公司）有EasyCyte 5、6和8三個成員，這一系列機器是*利用微毛細管技術為核心的細胞分析平臺，摒棄了傳統(tǒng)的鞘液流方式，采用*的微毛細管液流（上樣）設計，因而不需要鞘液，減少樣本和樣本處理時間和試劑。相關產品簡單便捷，zui基礎的EasyCyte 5就是一個簡單單激光，能檢測三種顏色的機器。
easyCyte系列產品的優(yōu)點主要在于系統(tǒng)不需要鞘液，這樣每8小時的廢液產生量不超過50ml。且上樣體系小，每個test只需1000-10000個細胞，減少樣本和樣本處理時間和試劑。Guava *的上樣系統(tǒng)預設了1塊96孔板與10個單樣品管（1.5ml或0.5ml tube）的位置，使得高通量上樣與中低通量上樣可同時完成，避免了從中低通量到高通量上樣時需要手動切換所帶來的麻煩。
另外在一些應用方面，easyCyte操作簡便，比如細胞凋亡檢測實驗，采用類似Annexin V.標準檢測試劑盒的標記物，及其自帶的分析軟件模塊，就能分析數據了。
獲得生物通2009年年度創(chuàng)新產品稱號的guava easyCyte™ 8HT細胞分析儀，其軟件系統(tǒng)發(fā)展得更加完善，在采訪過程中，我們了解到Guava設計了兩款智能化軟件控制，以配合不同層次的需求。guavaSuite就是一套為細胞凋亡研究的學者而設計的軟件，包括了Annexin V, Tunel, Cell Cycle等經典實驗，同時可以進行細胞計數和細胞毒實驗的研究。
這一軟件zui大的特點是預設了補償參數和實驗模塊，一鍵式完成實驗數據的獲取。Incyte軟件是為高通量數據分析度身定做的軟件，通過Incyte HeapMap功能可同時顯示6*96個數據信息，直觀化的信息顯示更有效地幫助學者做出快速準確的判斷。另一方面，Millipore地將并IC50/EC50的分析功能切入流式分析軟件中，可通過一組凋亡數據獲得凋亡分析結果和IC50/EC502項結果。
除此之外，easyCyte的系統(tǒng)和維護也是自動化的，這也就是說沒有經驗的研究人員也可以成功地操作這一機器。
另外一個方面，佛羅里達大學流式細胞儀科技主任Neal Benson認為，從理論上說，微毛細管系統(tǒng)分析儀可能會比傳統(tǒng)流式細胞儀更容易堵塞，尤其是分析大微粒的時候，這些微粒流動的慢，可能會引起流動微粒阻隔。Benson表示他并不清楚Guava在實際操作上是否更容易出現(xiàn)這個問題，而且他也承認各種流式細胞儀都時不時會出現(xiàn)堵塞的問題。生物通編者特別為此咨詢過Millipore的技術專家，專家表示Guava *的設計能有效解決這個問題，詳細的細節(jié)歡迎關注生物通后繼推出的技術解密報告。
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