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進(jìn)行抗原暴露和熱誘導(dǎo)處理的主要原因
閱讀：614 發(fā)布時(shí)間：2011-6-20免疫組織化學(xué)染色除了具有的特異性抗體、敏感的檢測(cè)方法和熟練的組織制備技術(shù)外，還需掌握IHC染色前的處理方法，包括抗原的暴露和修復(fù)，雖然其作用機(jī)理尚不十分清楚，但很重要且實(shí)用。目前用于檢測(cè)石蠟切片的90％左右的商品化抗體需采用抗原修復(fù)或抗原暴露方法，才能檢測(cè)到滿意的陽(yáng)性結(jié)果。
一、暴露和修復(fù)抗原的原因
在進(jìn)行常規(guī)石蠟切片或存檔標(biāo)本的回顧性研究時(shí)，必須進(jìn)行酶消化或熱處理誘導(dǎo)抗原的修復(fù)來(lái)提高IHC檢測(cè)的敏感性，使許多原來(lái)僅表達(dá)在冰凍切片上的抗原能用于石蠟切片。主要通過(guò)酶消化使抗原決定簇暴露，熱誘導(dǎo)斷裂交聯(lián)、溶解變性蛋白等，有利抗原抗體結(jié)合，使IHC敏感性增加。進(jìn)行抗原暴露和熱誘導(dǎo)處理主要有下列兩點(diǎn)原因。
（一）固定液的影響
甲醛在固定組織中所起的作用機(jī)理目前尚不十分清楚，其可能的機(jī)制是在用甲醛固定組織時(shí)，甲醛使蛋白質(zhì)發(fā)生凝固，在發(fā)生凝固的過(guò)程中可引起蛋白質(zhì)自身和不同的蛋白質(zhì)之間通過(guò)甲基化橋使蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)。交聯(lián)過(guò)程中可導(dǎo)致蛋白質(zhì)的三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)的折疊方向發(fā)生改變，出現(xiàn)空間阻礙，同時(shí)抗原與其他分子間也會(huì)發(fā)生交聯(lián)，形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)而掩蓋抗原決定簇。蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)的程度受甲醛溶液的pH值、溫度和固定時(shí)間的影響。為什么有些組織間質(zhì)抗原，例如纖連蛋白（fibronectin）、各型膠原和層黏連蛋白（1aminin）等，必須用胃蛋白酶處理才能獲得良好的結(jié)果?而末見(jiàn)用熱處理修復(fù)抗原的方法獲得成功的報(bào)道?為什么有些抗原決定簇不受影響，不需要抗原修復(fù)?例如LCA、T細(xì)胞、B細(xì)胞、CK、EMA和波形蛋白（vimentin）等。有人認(rèn)為，組織在脫水過(guò)程中對(duì)抗原性也有一定的影響，但無(wú)直接的證據(jù)。
（二）抗體制備的影響
抗體在制備過(guò)程中，尤其是單克隆抗體的制備，在篩選時(shí)一定要篩選能用于石蠟切片抗原決定簇的單克隆抗體。多克隆抗體絕大部分能用于甲醛固定的石蠟切片檢測(cè)，不需要抗原修復(fù)，部分抗體僅需酶消化，這可能與多抗的抗原決定簇眾多有關(guān)。但目前市售的大部分多克隆抗體均注明需高溫?zé)嵝迯?fù)，令人比較難以接受。而單克隆抗體從理論上說(shuō)是單一的抗原決定簇，雖然目前的絕大多數(shù)商品化單抗多是幾株混合出售，但與多抗相比還是比較單一。這里可能就存在某些對(duì)固定液較敏感的抗原決定簇空間結(jié)構(gòu)位點(diǎn)易改變，而某些抗原決定簇就相對(duì)較穩(wěn)定。