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一、配制培養(yǎng)基:50mL的培養(yǎng)基,可以用450mI DMEM (89%)+50ml胎牛血清(10%)+5ml雙抗(1%)配制。
二、配制細(xì)胞凍存液:現(xiàn)配現(xiàn)用,根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整培養(yǎng)基、血清和DMSO的比例,通常為6:3:1或7:2:1。例如,對(duì)于存活率高的細(xì)胞系,可以用培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1的比例配制,對(duì)于存活率低的細(xì)胞系或需要長(zhǎng)時(shí)間保存的細(xì)胞系,可以增加血清濃度。
血清使用注意事項(xiàng)
一、避免反復(fù)凍融。血清解凍后,可在2-8℃條件下儲(chǔ)存6周。如解凍后的血清儲(chǔ)存時(shí)間需要大于6周,建議分裝成合適的體積并重新凍存。
二、如血清中含有大量的沉淀,不建議直接過(guò)濾血清。如有過(guò)濾需求,可將血清分裝至無(wú)菌離心管中,稍微離心,取上清液直接加入培養(yǎng)基內(nèi)混合后再過(guò)濾。
三、血清沒(méi)有混勻且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白會(huì)變性形成沉淀。
四、使用時(shí)注意無(wú)菌操作,防止細(xì)菌污染
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