對(duì)于臺(tái)式掃描電鏡需要的生物樣品在制備時(shí)有哪些要求呢?今天就讓我們一起來了解一下吧。
臺(tái)式掃描電鏡的樣品，通常要求樣品*干燥，因?yàn)闃悠肥姨幱诟哒婵諣顟B(tài)。堅(jiān)硬、干燥的材料，如木頭、骨頭、羽毛、干燥的昆蟲或貝殼(包括蛋殼)在檢測(cè)時(shí)所需的進(jìn)一步處理很少，但是活細(xì)胞和組織以及完整的軟體生物需要化學(xué)固定來保存和穩(wěn)定它們的結(jié)構(gòu)。
固定通常首先是將樣品浸泡在含有化學(xué)固定劑(例如戊二醛，有時(shí)與甲醛結(jié)合)和其他固定劑 的緩沖溶液中，可能還有一步用固定。接下來就是將固定好的組織脫水。
由于空氣干燥會(huì)導(dǎo)致生物樣品塌陷和收縮，所以通常采用有機(jī)溶劑(如乙醇或丙酮)置換細(xì)胞中的水，再臨界干燥流體(如液態(tài)二氧化碳)置換這些溶劑來實(shí)現(xiàn)固定。二氧化碳終在超臨界狀態(tài)下被去除，因此在干燥過程中樣品中不存在氣液界面。
干燥樣品一般用粘合劑(如環(huán)氧樹脂或?qū)щ婋p面膠帶)固定在樣品臺(tái)上，并在用顯微鏡檢測(cè)前濺射金或金/鈀合金。如果要對(duì)生物體內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像，可以對(duì)樣品進(jìn)行切片(用切片機(jī))。
如果掃描電鏡裝備有低溫顯微鏡的冷凍樣品臺(tái)，可以使用冷凍固定，并用低溫掃描電子顯微鏡對(duì)冷凍固定的樣品進(jìn)行檢測(cè)。
冷凍固定的樣品可以在真空下在特殊設(shè)備中冷凍斷裂，以揭示內(nèi)部結(jié)構(gòu)，在保持冷凍狀態(tài)的同時(shí)濺射涂層并將其轉(zhuǎn)移到掃描電鏡冷凍臺(tái)上低溫掃描電子顯微鏡也適用于對(duì)溫度敏感的材料如冰和脂肪的成像。
冷凍破碎、冷凍蝕刻或冷凍再破碎是一種特別適用于正面觀察類脂膜及其摻雜的蛋白質(zhì)的制備方法。該制備方法揭示了嵌入在磷脂雙分子層的蛋白質(zhì)。
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