標(biāo)準物質(zhì)名稱：熒光分光度計檢定用硫酸奎寧溶液標(biāo)準物質(zhì)

生產(chǎn)廠家：四川中測標(biāo)物科技有限公司

相對擴展不確定度：2%，k=2

量值 空白，1.00×10-9 g/mL（Urel=3%），1.00×10-7 g/mL，4.00×10-7 g/mL，8.00×10-7 g/mL，1.00×10-6 g/mL

包裝規(guī)格：20 mL

有效期限：12個月

適用范圍：JJG 537-2006 熒光分光光度計

保存條件：低溫（2 ℃~8 ℃），避光保存

熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強、試樣量少的特點。本實驗的主要目的是通過學(xué)習(xí)熒光法測定硫酸奎寧，掌握VARIAN熒光分光光度計 的使用方法以及利用熒光法進行定量分析。

一、實驗?zāi)康?/p>

1.熟悉VARIAN熒光分光光度計的原理和使用

2.掌握激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的概念及測定方法

3.掌握用標(biāo)準曲線法進行熒光定量分析

VARIAN熒光分光光度儀

熒光分光光度計基本流程如圖：

光譜掃描的實現(xiàn):

儀器有兩套光柵分光系統(tǒng)，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射光柵動的形式可形成兩種光譜：

激發(fā)光譜：激發(fā)光柵轉(zhuǎn)動

發(fā)射光譜：發(fā)射光柵轉(zhuǎn)動

熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜

固定發(fā)射光波長.以不同波長的入射光激發(fā)熒光物質(zhì),化合物發(fā)射的熒光強度F與入射光波長的關(guān)系曲線λ

2.發(fā)射光譜 (或熒光光譜 )

固定激發(fā)光波長. 化合物發(fā)射的熒光中各種波長組分的熒光強度.

二、實驗原理

1.硫酸奎寧的分子 結(jié)構(gòu)特征

硫酸奎寧屬生物堿類抗心率失常藥,其分子具有喹啉環(huán)結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生較強的熒光,可直接用熒光法測定其熒光強度,由校正曲線求出回歸方程進而求出試樣中奎寧的濃度.

2.定量依據(jù)與方法

(1)定量依據(jù)：

在低濃度時,溶液的熒光強度與溶液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系

If = Kc

(2)定量方法:校正曲線法

標(biāo)準曲線法：

配制一系列標(biāo)準濃度試樣測定熒光強度，繪制標(biāo)準曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強度，在標(biāo)準曲線上求出濃度;

三、實驗內(nèi)容

•1.儀器和試劑:

儀器:熒光分光光度計,刻度吸管,容量瓶

試劑:0.1μg/ml硫酸奎寧(儀器室),

100μg/ml硫酸奎寧標(biāo)準溶液,

硫酸奎寧待測液

0.05mol/l稀硫酸溶液

•2.實驗步驟:

1.標(biāo)準溶液的制備:

精密吸取硫酸奎寧標(biāo)液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分別置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,制得對照品的標(biāo)準系列溶液,并計算濃度.

2.待測試樣溶液的制備:

吸取硫酸奎寧待測液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,得待測試樣溶液.

3.測定:

(1)用0.1ug/ml的硫酸奎寧測定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜:

開機—打開光譜掃描工作站--方法建立—調(diào)零--激發(fā)光譜的測定—發(fā)射光譜的測定—打印結(jié)果

(2)校正曲線法測定試樣溶液的濃度:

打開濃度測定工作站--方法建立--校正曲線的測定--試樣溶液的測定—打印結(jié)果--關(guān)機

注意事項：溶液配制過程中需應(yīng)當(dāng)規(guī)范操作各種容量儀器，防止誤差；樣品測定時，應(yīng)該按照從低濃度到濃度的順序，盡可能的減少測量誤差；儀器校正后制作標(biāo)準曲線的參數(shù)應(yīng)該和測定樣品時保持一致。