TMB Chromogen Solution (HRP-based Elisa)

TMB顯色液（Elisa HRP顯色用）

產(chǎn)品簡介：

TMB（3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine）是辣根過氧化物酶（HRP）的常用顯色底物之一。在HRP的催化下，TMB被H2O2氧化生成藍(lán)色產(chǎn)物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應(yīng)后，產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，*大吸收峰為450 m。傳統(tǒng)的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到兩管，使用前才可混合使用），并且容易產(chǎn)生沉淀，使用起來相對不方便，且容易導(dǎo)致操作誤差。為克服以上缺點(diǎn)，我們采用*新的TMB顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑混合配成單一溶液，本產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

1. 即開即用，操作簡單，使用前無需做AB液混合的準(zhǔn)備；檢測靈敏度不低于AB液體系；

2. 僅由單一溶液組成，簡化了操作步驟，也降低了操作誤差，結(jié)果更加穩(wěn)定；

3. 含有*的穩(wěn)定劑，保證溶液4℃下長期保存；

4. 相比于其他HRP酶顯色底物（如ABTS和OPD）相比，檢測靈敏度更高，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機(jī)溶劑，安全無毒。

本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液，適用于ELISA檢測，操作時(shí)只需加入200μl即用型的顯色液，做簡單孵育，加入2M H2SO4終止反應(yīng)后，即可用分光光度計(jì)在450nm處測定吸光度。本品可供完成約500個(gè)樣品的檢測。另外，本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過氧化物酶量的檢測。

使用方法：

1．使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用。

2．對于ELISA檢測：參考ELISA 檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟，當(dāng)加入HRP標(biāo)記的抗體并孵育一段時(shí)間后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200μl TMB顯色液；對于在96孔板內(nèi)進(jìn)行的其他適當(dāng)檢測（如檢測組織或細(xì)胞樣品內(nèi)源性過氧化物水平）：直接在96孔板內(nèi)加入10-20μl樣品，之后加入200μl TMB顯色液。

3．室溫避光孵育3-30min或更長時(shí)間（可長達(dá)24h），直至顯色至預(yù)期深淺（此時(shí)反應(yīng)液為藍(lán)色）。

4．加入50μl 2M H₂SO₄終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，隨后在450nm測定吸光度。或著在370nm或652nm測定吸光度。

常見問題：

一. 背景顯色太深

1．如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，如商業(yè)化的封閉液或者商業(yè)化的和一抗相同來源的血清（5-10%）進(jìn)行封閉。另一方面，直接使用經(jīng)過適當(dāng)親和吸附的二抗，以減小二抗的非特異性交叉吸附。

2．可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛?。另外，選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長洗滌時(shí)間。

3．可考慮TMB底物本身反應(yīng)過于強(qiáng)烈。為了避免沉淀的產(chǎn)生，可在終止反應(yīng)后馬上讀數(shù)，或者進(jìn)一步稀釋一抗和HRP結(jié)合物。 _

二. 沒有顯色或顯色太弱

1．適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測二抗是否被正常顯色。

2．可以使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

3．可以適當(dāng)延長顯色時(shí)間。

4．如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA

注意事項(xiàng)：

1、TMB對人體有刺激性，操作時(shí)請小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2、本產(chǎn)品為無色至微藍(lán)色透明溶液，如果發(fā)現(xiàn)TMB顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成較深的藍(lán)色，應(yīng)該停止使用。

3、本產(chǎn)品*限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃避光保存，有效期一年。