親水作用色譜（HILIC）已經(jīng)作為一種分離強(qiáng)極性化合物的工具得到廣泛應(yīng)用。事實(shí)上，它已經(jīng)成為一種較為普遍的小分子分離技術(shù)。相比之下，即使HILIC的分離選擇性在某些情況下（如在糖基化蛋白質(zhì)的表征中）具有很大價(jià)值，HILIC在大分子方面的應(yīng)用仍相對(duì)有限。分析蛋白糖基的一種標(biāo)準(zhǔn)方法是通過(guò)酶或化學(xué)方法將其從對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)中釋放出來(lái)，然后采用HILIC進(jìn)行色譜分離。以經(jīng)過(guò)優(yōu)化的亞2 μm酰胺鍵合固定相為基礎(chǔ)的UPLC型分離通過(guò)提高分離速度與分離度，*顛覆了游離蛋白糖基的HILIC分離。盡管游離糖基分析是一種黃金標(biāo)準(zhǔn)方法，但一直以來(lái)它都需要冗長(zhǎng)而繁瑣的樣品制備技術(shù)。雖然zui近推出的GlycoWorks™RapiFluor-MS™ N-糖分析試劑盒能夠彌補(bǔ)多數(shù)不足，但在有些情況下仍需要研究表征糖基化蛋白的替代方法，例如在需要闡明修飾位點(diǎn)時(shí)。

為了在糖基仍連接在對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)上時(shí)即對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充分析，我們推出了經(jīng)優(yōu)化的HILIC固定相及相應(yīng)方法用于分離完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型。研究采用大孔徑（300Å）酰胺鍵合有機(jī)硅（亞乙基橋雜化，BEH）固定相和精心開(kāi)發(fā)的方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)質(zhì)量范圍為10~150 kDa的完整蛋白質(zhì)糖型的出色分離。